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问
组织蛋白含血量太多了影响后续实验,怎样在裂解组织前应用红细胞裂解液呢?是把组织剪碎后用红细胞裂解液吗?
dxy_gwrp7ndq
新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液, 再加入红细胞裂解液
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问
细胞内有空泡,是否是正常现象?
bamboopiggy
这个没事,细胞密度大了就这样,注意传代就好
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问
最近做实验时,老是遇到细胞污染,应该采取哪些措施呢?
dxy_btpk2zd7
在我们日常进行实验的过程中,要确保细胞干净,避免污染,应该从正确使用个人防护工具,定期检查是否含有支原体污染,以及确保实验操作台面的干净并及时注意清洁消毒正确使用个人防护工具。
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问
悬浮性细胞应如何传代处理?
bamboopiggy
如果细胞密度够,可以直接吸出一部分加培养基,如果细胞密度不够,可以离心后取沉淀加入培养基
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问
如何更温和的吹打消化后的贴壁细胞以提高细胞品质?
bamboopiggy
主要是控制好胰酶消化时间,别消化不足或过了,对细胞的吹打不宜太多次
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问
悬浮细胞培养状态很差,细胞成团,细胞上有很多毛毛点点的东西,有什么办法可以挽救吗
bamboopiggy
血清不好,毛毛的东西是细胞碎片,换好血清,离心换液
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问
caski细胞培养很慢,有没有什么方法可以加快培养速度啊
bamboopiggy
可以更换好的血清,或半量换液,实在要扩,可以提高血清浓度到15-20%
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问
GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?
bamboopiggy
glumax是glutamine的替代物。GlutaMAX™-I是一种二肽——L-丙氨酰-L-谷氨酰胺——在水溶液中更稳定,不会自发降解。一般如果细胞状态不好,或者是培养基中注明要额外添加glutamine,可以用glutamax
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问
各种细胞培养用的dish,flask是否均相同?
bamboopiggy
差不多吧,一般都是底面处理过的,就是有的品牌有假的,需要注意,假的底面处理的不匀
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问
细胞欲冷冻保存时, 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?
bamboopiggy
一般1x10^6每ml就可以,细胞浓度不宜太低,也不能太高
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问
细胞培养时~大家一般提前多久预热?
dxy_g0ob0d88
提前拿出来30分钟足够了,我们有时候也会放室温
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问
293 细胞冻存一定要加血清吗?我们根据卖家提供的无血清培养基和冻存步骤进行冻存建库,总是复苏不起来,活不过两代就死翘翘了~
dxy_gwrp7ndq
冻存的细胞状态必须好且处于对数生长期,该用90%血清+10%DMSO,可能会取得好的效果;复苏的温度应在39-40度之间,复苏与冻存正好相反,应该速溶速化。
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问
THP1细胞养久了容易抱团或者贴壁,然后还会有一些小黑点,应该怎么样培养?
异乡人hyq
细胞养不好,可能的原因有,THP-1细胞特别依赖细胞浓度,ATCC上10 5到106每ML,是一个很高的密度,细胞少了就不太容易养好。细胞株的来源很重要,如直接来源于ATCC(American Type Culture Collection 美国模式菌种保藏中心)生命力要强于国内细胞库的。注意细胞的密度一定要高,介于5×105—— 106/ML之间,增值的快。细胞数量太少,不适合THP-1生长,一
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问
细胞复苏之后,为什么聚团?
异乡人hyq
首先,常规的“抱团”是指贴壁细胞被消化后悬浮状态下的聚集情况。细胞在贴壁生长时,聚集在一起是正常现象。当周围细胞寥寥无几,而这一团已经叠层生长,这就是在悬浮状态就已经聚团的细胞再贴壁导致的。相同条件下,培养的癌细胞对密度依赖性的生长抑制敏感性降低,所以即使在形成单层后,也不会停止生长,而是相互堆积形成多层生长的聚集体。 其次,部分细胞被污染后会出现细胞聚团,这和操作有很大关系,比如:传代铺板时,是
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问
淋巴结组织分散成单个细胞
异乡人hyq
三种方法,分别是粘附贴壁法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法。一、粘附贴壁法我们将单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中,37℃温箱静置1h左右,这时候你会发现,“死皮赖脸”的单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上,而未贴壁的细胞几乎为纯淋巴细胞,随后用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。那么此时就达到一个分离的效果。但注意因为B细胞也有贴壁现象,分离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。二、吸附柱过滤法同样将单个
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问
怎么提取鼠心脏成纤维细胞
异乡人hyq
改良联合酶消化法可以稳定的提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞。
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问
请问连翘脂苷A能通过血脑屏障吗?影响化合物药物通过血脑屏障的因素有哪些?如何确定?
异乡人hyq
连翘脂苷A可以通过血脑屏障。脂溶性越高的物质越容易通过,水溶性越强的通过能力差,与血浆蛋白的结合程度越高,通过越不易。可以通过载体转运系统,利用高选择性的载体蛋白,可以使一些难以通过血脑屏障的物质顺利入脑。
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问
动物流式实验怎么设门?
异乡人hyq
一般根据散射光进行设门,即我们通常所说的前散(forward scatter, FSC)和侧散(side scatter, SSC)来设门。FSC的大小与细胞的直径成正相关,不同的细胞,细胞越大,其FSC越大;反之越小。SSC的大小与细胞内颗粒结构的质量成正相关,不同的细胞,细胞内颗粒结构越复杂,质量越大,其SSC越大;反之越小。
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问
加药处理细胞,收集细胞提总蛋白跑WB,漂着的细胞要不要收集?收和不收对结果影响大吗?
米米米小喵
死细胞离心去掉,处理细胞时摸好条件,尽量不要让细胞死的太厉害,细胞增殖受到抑制的组可以少加点裂解液,方便调齐。
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问
细胞水平要做WB,多少细胞提的蛋白够做WB?跟细胞类型有关吗?
whilt-shirt
基本上10^6细胞就够了,可以再多一点
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