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问
用RIPA提取总蛋白为什么会有粘稠的不可溶沉淀?是什么?如何解决?
dxy_gwrp7ndq
产生粘稠物的主要原因是RIPA不能将所有样品全部裂解,产生的不可溶组分中主要含有核酸残团,细胞碎片(有些组织样品还含有油脂),和部分蛋白,因此RIPA提取的仅仅是可溶性蛋白,并非真正的总蛋白。
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问
如图,培养皿培养12h出来的,是什么东西?
bamboopiggy
感觉很漂亮的一个菌,这皿细胞别要了
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问
通过免疫组化或免疫细胞化学的方法检测组织或细胞中的Bcl-2,底物颜色没有变红是因为什么?
bamboopiggy
要么你反应过程中有步骤做错了,要么是bcl2在你组织中表达量低
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问
细胞进行解冻或传代后细胞的附着力偏低
bamboopiggy
可能细胞本身就是个半贴壁的细胞,如果不影响实验就这么用,如果影响实验,就用促贴壁试剂,预先处理皿底
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问
为什么细胞解冻后缺少活力,活细胞占比较低?
Topmicro
可能的原因有1.冻存方法不合适,包括冻存条件和冻存液;2.冻存后长时间未复苏;3.解冻方法不合适。4.细胞本身原因。
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问
请问细胞传代最佳密度多少
dxy_gwrp7ndq
取决于什么样的细胞了,娇贵点的、难养的除了条件控制好外,密度在1-2x105/ml为宜,一般情况下5X104至8X105都没问题,具体看你实际培养经验去了,像肿瘤类细胞那真的挺随意的了,浓度别太离谱就行了,很好培养。在进行传代时,如果是悬浮细胞,只需简单稀释即可,若需完全更换培养液只需低速离心沉淀,再悬浮于合适的培养液中即可。传代密度太低,细胞容易死亡,表现出细胞在达到增长前有较长的滞留期
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问
为什么细胞过密,状态就不好了
bamboopiggy
因为细胞不是单层了,夹在中间的细胞获得的营养物质减少。状态差
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问
请问细胞培养中长的慢不贴壁怎么办求助
bamboopiggy
1.半量换液 2.在皿底预先铺一层促贴壁试剂,试试
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问
求助!培养细胞时为什么靠近培养瓶瓶口处的细胞容易脱落?
bamboopiggy
因为那个位置你可能不好消化,导致细胞密度太大,就脱落了
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问
我养的MC3T3,刚开始挺好的。穿过两次代之后,就发生细胞成片脱落,求助
bamboopiggy
成片脱落,可能是你消化的不匀,局部细胞太多了,你换个皿,少加点细胞试试
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问
细胞培养基使用前预热,哪种方法更好?
bamboopiggy
培养基在实验前半小时,从冰箱里拿出来,放入水浴,对细胞更好一些,因为细胞也是在37度培养,加入冷的培养基,会刺激细胞
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问
质粒转染过程中对转染细胞的要求有哪些?
dxy_gwrp7ndq
转染时细胞密度以 70~90%(贴壁细胞)或 2×106~4×106细胞 / mL(悬浮细胞)为宜,细胞密度过高会严重影响细胞状态(周期进程阻滞,凋亡增加等)
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问
表达量高的亚克隆细胞,个头特别大,一般细胞直径在16-17左右,但是它能到20左右,而且细胞数少,有什么方法可以降低细胞直径
bamboopiggy
是不是你的这个基因影响细胞的size?你可以直接挑出单克隆,进行单独培养,看看是否和正常的有差异。
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问
如何培养血管内皮细胞?
丁香清香
培养血管内皮细胞所用培养基与大动脉内皮细胞培养基相同,脐带静脉内皮细胞、大动脉内皮细胞易于培养,既使不加生长因子在最初几代细胞也会增殖良好。
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1062 围观
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问
实时荧光定量PCR进行HRM曲线进行分析HRM的温度条件应该如何诱导异源双链的发生?
未来9
利用PCR缓慢变性: 95℃变性5分钟,然后以 0.03℃/S速率缓慢复性至25℃,使杂合子形成异源双链
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问
在做实时荧光定量PCR中的基因分型,在扩增体系中加入石蜡油和甘油有什么样的好处?
天一湖医者
石蜡油,甘油具有良好的渗透能力,可以进入细胞内部和胞内大分子形成氢键以取代干燥脱除的水分,从而维持蛋白质、碳水化合物及脂肪等大分子活性物质的原有结构。此外,还可以起到降低细胞脱水皱缩和缓解复水肿胀的效果。另外醇和糖类相似均具有醇和糖类羟基官能团,均能产生“优先水化作用”以及改变体系的玻璃态转变温度等,故在发挥保护效果方面和糖类具有一定共性。须知蛋白在使用时候存在冻融情况下建议可以选甘露醇、右旋糖酐
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问
实时荧光定量PCR,扩增后进行链熔解曲线基线高且杂峰较多怎么回事?
bamboopiggy
melt curve杂峰多,说明你的primer不特异,有非特异产物的产生
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问
培养的细胞为什么总是一言不合就抱团,吹打之后也还是会这样?有什么很好的办法解决这一问题吗
丁香清香
引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。
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1635 围观
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问
细胞培养过程中碰到的小黑点,到底是什么啊,一直都有
丁香清香
在细胞培养中常可见到细胞及培养液中有一些大小不等、形态不同的黑色未知颗粒。有可能是细胞碎片或者污染如:支原体、真菌和寄生虫等
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2337 围观
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问
分选纯度的影响因素有哪些?
bamboopiggy
标本制作要轻柔,最好提前做个预实验,不要上来就直接做
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