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        动物流式实验怎么设门?

        相关实验:用流式细胞仪检测细胞因子的分泌和分离分泌细胞因子的细胞

        user-title

        balalaLy

        在取动物组织细胞做流式实验时,

        流式设门应该用每只动物自身的未经过染色处理的组织细胞还是每组挑一只动物未染色处理的细胞,又或者是整一批实验动物中选空白组的任一只动物的组织细胞就可以了?

        如果是第一种那每只动物提的细胞都得分一部分出单独设门,工作量剧增。

        后面两种情况工作量没那么大。

        想问,大家一般都是怎么做的呢?如果选第三种投稿的时候会不会被质疑?或者是答辩的时候被鄙视?

        wx-share
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        5 个回答

        user-title

        异乡人hyq

        有帮助

        一般根据散射光进行设门,即我们通常所说的前散(forward scatter, FSC)和侧散(side scatter, SSC)来设门。FSC的大小与细胞的直径成正相关,不同的细胞,细胞越大,其FSC越大;反之越小。SSC的大小与细胞内颗粒结构的质量成正相关,不同的细胞,细胞内颗粒结构越复杂,质量越大,其SSC越大;反之越小。

        user-title

        笨笨女人

        有帮助

        所谓的门,在流式细胞仪检测的时候术语叫做gate。

        流式细胞仪是针对细胞(后者颗粒)的群来做研究的。往往是先选中感兴趣的一个细胞群,再分析下一步的染色,可以进行很多分级。比如先从所有细胞中画出淋巴细胞,可以在FSC-SSC散点图上画出淋巴细胞的群,比如一个方框,或者任意曲线的gate,也就是所谓的门。把淋巴细胞括在内。然后在另外一个散点图上只显示这个gate里的细胞,但是把横坐标和纵坐标改为其他荧光标记。

        总之,门就是一个选择细胞群的手段。

        user-title

        AngeliI6VZ

        有帮助

        为了正确地识别目的细胞,需要综合生物知识和流式操作经验,才能正确的圈出表示最终结果的目的区域。设门是一个全有或全无数据减少处理。将门内细胞内移动到下一个分析要点,而同时门外的细胞即通过像素,也被排除在外。

        1. 尽可能多地了解目的细胞群体

        2. 细胞大小并不代表一切

        3. 检测上机时的稳定性

        检测上机时的稳定性,选取一个散点图观察上机的流速均匀性。通过这样一个图可排除上机操作不当的人为误差。

        4. 双峰的消除

        细胞团块,当它们通过激光截距,将比单个细胞长。这反过来又影响了信号的区域。使用脉冲几何门(如 FSC-H x FSC-A),双峰可以容易被消除。

        5. 通过对照组引导

        在设门方案中假设感兴趣的门不能使用,可用反向设门工具检测数据,以确定哪些细胞将落于最终群体

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        方法有几种: (1) 阈值设门。FSC (前向散射光)是最常用的阈值参数。FSC和细胞的大小正相关。用FSC设阈值,可以使低于该阈值的细胞碎片等其他杂质的信号不被处理。(2) 散射光设门。以FSC和SSC (侧向散射光)联合设门较常用。其最大优点是可以排除碎片或噪声的干扰。可以根据FSCvsSSC散点图.上不同细胞分布不同来设门目的细胞群。

        另外还有荧光设门、反向设门和组合设门。流式细胞术的数据分析过程实际上就是选门和设门的过程。应该注意到设门是-一个主观行为,是人为做出的决定,不同的人设门会存在很大差异,它是流式细胞术中最难掌握的技术。因此,对设门有2点需要把握:首先,设门尽可能客观;其次,应该认识到设门需要主观决策。为了尽量减少主观判断带来的误差,最好分选--些细胞用显微镜观察来进一-步确认门的客观性和准确性。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        动物做流失,可以用三只空白小鼠的细胞混合物,然后设门

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