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问
请问提取蛋白原液第一天测BCA后忘记放负80冰箱,4度冰箱过夜,担心蛋白降解,第二天重新测BCA,为什么有的样本蛋白浓度反而升高
whilt-shirt
BCA法本来就存在误差,你这个只能说是误差,并不能说是升高了
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问
请问老师跑成这样什么原因呀?
whilt-shirt
胶有问题或者电泳液过期了,建议重新配胶电泳
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问
CTAB法提取植物基因组DNA总失败,怎么做才能成功?
Eason老歌迷
我觉得你可以注意以下几点。你磨样的时候一定要使材料处于低温状态。不然啊DNA降解得很厉害。加入异丙醇后,出现的DNA絮状物给他挑出来,不要离心,不然不完整的DNA会增多。
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问
对提取出的人的全基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳,胶孔总会很亮,仿佛有DNA的残留,未完全跑下来,为什么?
天一湖医者
主要从以下两个方面考虑:1、PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物
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问
蛋白原液做完BCA放在4度过夜了,第二又测了一次BCA,结果如图,这批蛋白还能用么?
balalaLy
肯定是有降解的。BCA测浓度只是相对定量。跟BCA试剂的作用时间和作用温度很大关系。只能同一时间点测的样品间做比较,前后两次的只能看个大概。跑wb的话应该也是可以跑出来的,你就跑跑看呗。结果符合预期就当做一次重复实验呗。
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问
用KOD高保真酶做PCR扩增200+bp产物,模板含量低,延伸时间分别设1,5,10s,相对Taq酶出现很多非特异扩增,怎么办?
Eason老歌迷
可以适当的加入dmso,来增加特异性。也可以适当提高退火的温度
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问
免疫共沉淀标签的作用?
bamboopiggy
有标签,用标签抗体,比特异性抗体便宜且好用
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问
定量PCR中两步法跟三步法有啥区别?对结果影响大吗?
bamboopiggy
对定量pcr来说:因为产物是短片段,用两步法或三步法影响不大。两步法即循环扩增中设置2个步骤,一个是95度变性,另一个是退火与扩增的温度,一般设置在55~60之间,主要用于扩增短片断,节省时间。三步法就是平常见到的方法,扩增分三步,变性,退火,延伸。时间稍长。
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问
请问,提取的蛋白原液做完BCA放在4度冰箱过夜,忘记放在负20度了,还能用么,会不会谅解很多
迟C迟
问题不大,4度也不会降解这么快。长时间不用还是建议低温保存。
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问
DNA琼脂糖凝胶电泳
dxywode
电泳时间可能过长,一般75v×30min左右,但是具体看溴酚蓝得离孔距离和目的条带离孔距离。利用电泳可以确定胶体微粒的电性质,向阳极移动的胶粒带负电荷,向阴极移动的胶粒带正电荷。金属氢氧化物、金属氧化物等胶体微粒吸附阳离子,带正电荷;非金属氧化物、非金属硫化物等胶体微粒吸附阴离子,带负电荷。
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问
逆转录PCR实验中,逆转录后,一般取多少的cDNA进行后继的PCR圹增?
迟C迟
我们实验室是逆转录之前控制逆转录的量,然后PCR体系中模板量用4微升,一般不超过体系的10%。
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问
DNA转录技术需要注意的易错细节有哪些?
Eason老歌迷
所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。用大口滴管或吸头操作,以尽量减少打断 DNA 的可能性。提取 DNA 过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。 要用新鲜样品或液氮冷冻-70 度保存的样品。这样通过降低内切酶的活性 DNA 的降解。
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问
ip实验IgG组也有条带什么原因
dxywode
你的样品是否煮样? IgG的轻链大小25KD,重链大小为50KD,所以很有可能是重链。建议IP抗体和WB抗体使用不同种属来源的一抗。
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问
巨噬细胞造泡沫细胞模型?
天一湖医者
是不是细胞已经处于发炎状态了?
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问
PCR结果CT值多少比较适合
迟C迟
Actin的CT值一般会小一点,20左右。目的基因看表达,一般低于37/38都还能用,太低可以稀释样本。
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问
请问用trizol提取的DNA可以用于表观修饰的实验吗?(如甲基化、CHIP等)
Guoood
可以使用传统trizol 法提取DNA进行甲基化等表观遗传实验,用试剂盒纯度和浓度反而不如trizol 法
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问
请问超声随机切断DNA为什么被淘汰了?有什么弊端吗?现在这个微球菌核酸酶又有什么优点呢?
Eason老歌迷
你都说了,超声是随机切断,那肯定,没有酶切法好。它一个随机切断,没有确定性,一个是酶切,有固定位点。
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问
请问我提了牙龈成纤维细胞原代,传代时候一直在培养基中加双抗,现实验需要去除双抗干扰,但是细胞一换成无双抗培养基就死怎么办?
bamboopiggy
是因为污染么?一停双抗细胞就污染了?你要去双抗的目的是什么呢?转染?其实现在好多转染试剂毒性没有那么大,不一定非要去除双抗。
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问
这个图是怎么看出结果的,我知道结果,我不知道怎么看出来的通过染色颜色的深浅嘛?求求各位大佬指路
dxywode
请问是什么图呢?上传了我分析一下。
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问
怎样判断小鼠腹腔注射是否打入了腹腔而不是肠内?
bamboopiggy
一般针头进入腹腔,不会扎到肠的,肠外面有浆膜层,会滑开,但是扎入腹腔后,要回抽一下,防止扎入血管
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