实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问外泌体提取rna后，检测内参不齐，需要引入外参吗？

bamboopiggy

可以引入外参，但是要满足以下条件:1. 与待检的目的RNA在样本中具有一样的存在形式，即囊泡包裹状态存在；2. 在外泌体分离富集过程中与待检外泌体RNA具有一样的动力学行为；3. 在外泌体RNA提取及PCR检测过程中具有一样的效率。也即可以完整的模拟目的基因在整个液体活检过程中的动力学变化。

2 回答740 围观

问克隆较长片段的基因组DNA的时候，怎么检测模板DNA是否合格？提DNA的时候有什么需要注意的地方？用什么方法提？

Eason老歌迷

提dna需要注意的点，比如说，你在操作时一定要轻柔，动作要缓和，避免剧烈运动

4 回答595 围观

问基因扩增时候以cDNA为模板，为何扩增出一片弥散的带？

dxywode

我也是用cDNA做模板的，没有出现过弥散带的情况，但经常出现非特异性条带。出现弥散带的原因可能是你在做凝胶电泳时电泳液被污染或者是做的胶有问题，也可能是你的cDNA部分降解了，至于降解的原因主要是由于时间和温度。扩增完的东西要立即进行电泳，其次电泳的室温不宜太高时间不要太长，一般最多半个小时左右。另外在扩增过程中，由于气候的缘故，部分PCR仪在室温超过30度后就不能正常工作了，这要看PCR仪的型号

4 回答4811 围观

问小提质粒的产物始终很低，可能是什么原因？

Keven轩

可以试试热洗脱冷结合，最后一步离心除去乙醇之后在60度金属浴上烘干5min让乙醇充分挥发，同时减少洗脱液的量

3 回答518 围观

问在用无水乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAC或NaCL至最终浓度达0.1-0.25MOL/L?

bamboopiggy

乙醇沉淀DNA需要盐离子,用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,降低DNA分子间的斥力,才能沉淀完全.所以需要加NaAC或NaCL

3 回答1715 围观

问为什么要用pH8的Tris水溶液饱和酚?

bamboopiggy

一、水饱和酚又叫水平衡酚。水饱和酚的PH小于7，一般是PH为5.0左右，通常与异硫氢酸胍一起使用，用于细胞RNA的提取，在酸性环境中，DNA在酚相，RNA在水相。两者就分开了。二、Tris饱和酚一般PH大于7.8，用于DNA的提取。其中，酚是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出。而Tris的主要作用是防治止酚类氧化，若酚类氧化，则会形成醌（两个苯环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构

3 回答3634 围观

问如果最有效的提高DNA提取的纯度？

bamboopiggy

1.细胞充分裂解 2 沉淀DNA时加足量甚至过量的异丙醇，3 ，用rna酶处理，去掉其中的rna。 4，晾干过程要充分。

3 回答953 围观

问为什么不能用质粒DNA来提取基因组DNA？

未来9

基因组DNA的抽提，一般不会用到质粒抽提的试剂盒，原因是由于两者的原理完全不同

3 回答1086 围观

问DNA纯化的目的是什么？

未来9

目的是回收得到纯的目的DNA片段,去除影响DNA连接酶活性的物质以及其它的DNA片段

3 回答1034 围观

问基因组DNA提取使用试剂盒如何避免污染？

未来9

所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时

3 回答1089 围观

问DNA测序数据可视化，可以使用哪些软件

未来9

目前常见的基因组可视化工具有Circos软件、Integrative Genomics Viewer(IGV)、GBrowse等

3 回答809 围观

问呈粉红色的酚可以使用吗?

bamboopiggy

不能用了，苯酚暴露在空气中被氧气氧化为醌而呈粉红色。所以还是再买一瓶吧

3 回答315 围观

问如何才能去提高DNA的提取率？

bamboopiggy

减少洗脱体积，增加洗脱次数。再就是裂解细胞要严格按照protocol来，别裂解过了，也别裂解的不够。

3 回答2005 围观

问DNA提取洗脱体积太小，50ul会有什么影响？

Keven轩

回收的DNA浓度会比较高，但是量不多

4 回答467 围观

问为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液?

bamboopiggy

TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在TE中的稳定性较好,不易被破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液中保存.

3 回答5634 围观

问在保存或抽提DNA过程中，需要哪种缓冲液？如果需要，哪种缓冲液比较好？

Keven轩

一般是用1X PBS磷酸盐缓冲液

3 回答440 围观

问为什么需要使用无水乙醇来沉淀DNA?用95%乙醇可以吗？

bamboopiggy

原因：1.DNA不溶于乙醇2.乙醇可以吸附水分子（极性相同）,使得溶液中相对的水分子减少,增大了DNA在水中的相对浓度.3.附：乙醇沉淀DNA需要盐离子,用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,降低DNA分子间的斥力,才能沉淀完全.可以用95%的，就是会增大液体的体积

5 回答6321 围观

问质粒构建整个流程和软件

juyue2010

snapgene软件不错，简单易学，功能齐全

6 回答887 围观

问吲哚美辛腹腔注射试剂怎么制备

dxywode

本试验处方中以二甲基甲酰胺和注射用水作为混合溶媒，提高吲哚美辛的溶解度，乙醇胺调节PH值，进一步增大吲哚美辛溶解度，乳酸调节pH值减少刺激性。吲哚美辛易溶于二甲基甲酰胺，但当加入等体积注射用水后吲哚美辛易析出。此外pH值的变化也能影响吲哚美辛的溶解。因此本处方中的影响因素主要有吲哚美辛的投药量，二甲基甲酰胺用量，乙醇胺用量及pH值的大小，根据主要影响因素设计如下的三个处方，通过观察是否有药物析出以

3 回答828 围观

问请问植物原生质体制备和培养过程中维持细胞渗透压的除了甘露醇还可以用什么物质？

bamboopiggy

山梨糖醇和海藻糖也可以，但是看文献，还是用甘露醇的多。

5 回答689 围观

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