用KOD高保真酶做PCR扩增200+bp产物，模板含量低，延伸时间分别设1,5,10s，相对Taq酶出现很多非特异扩增，怎么办？

可以适当的加入dmso，来增加特异性。也可以适当提高退火的温度

对PCR反应缓冲液的组成进行了最优化重组，使之较以往的KOD DNA多聚酶相比伸长性及扩增效果均有所提高，可对更多种类的目标物进行PCR反应。

必要时重新设计引物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。

提高你的annealing temperature，减少非特异性结合，至于延伸时间，因为一般酶是30s，1kb，你这个用7-10s延伸都可以，或者直接换用两步法也可以。