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        逆转录PCR实验中,逆转录后,一般取多少的cDNA进行后继的PCR圹增?

        相关实验:定性 PCR 实验

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        dxy_a3ehs9w7

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        4 个回答

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        天一湖医者

        有帮助
        建议不要把引物和buffer还有酶预混,酶在低温也是有活性的,容易形成引物二聚体,而且万一你的引物设计的有问题,那你混好的东西就全浪费了。
        1000ng太高了,可以稀释成100ng/ul,然后加1ul就够了
        user-title

        迟C迟

        有帮助

        我们实验室是逆转录之前控制逆转录的量,然后PCR体系中模板量用4微升,一般不超过体系的10%。

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        bamboopiggy

        有帮助

        这个取决于你要做多少个基因的检测啊,或者你是问一个孔加多少?我们一般每孔放0.02ug

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        未来9

        有帮助

        不要超过PCR体系的10%。

        逆转录的Buffer体系(主要是缓冲体系和镁离子)会影响后续PCR的Buffer 体系。

        另外,配制PCR体系,每种成分的加样量不要低于1ul,不然实验重复性会非常糟糕了;引物和PCR成分可以事先预混,cDNA可以稀释后再加。

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