定量PCR中两步法跟三步法有啥区别？对结果影响大吗？

两步法是只有循环中只有“变性”—“退火延展”两个温度变化
三步法是“变性”—“退火”—“延展”三个温度变化
简单说两步法就是2个温度循环
三步法就是3个温度循环
用两步法快些，但要看酶活性，
三步法比较保险。

对定量pcr来说：因为产物是短片段，用两步法或三步法影响不大。

两步法即循环扩增中设置2个步骤，一个是95度变性，另一个是退火与扩增的温度，一般设置在55~60之间，主要用于扩增短片断，节省时间。
三步法就是平常见到的方法，扩增分三步，变性，退火，延伸。时间稍长。

二步法三步法区别：

1、步骤不同：两步法退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，而三步法则分两次完成。

2、用时不同：两步法减少一次升降温过程，提高了反应速度，用时较短。而三步法则比两步法用时更长。

3、适用条件不同：两步法中，PCR扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成。三步法的PCR扩增区则较长，需要降低系统温度，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

对结果影响不大，但如果你想得到更加严谨的数据，三步法用于定量pcr是更准确的