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问
这个是修改后的buffer,但是结果却找不到我的引物序列?有没有朋友知道的,求指导。十分感谢
天一湖医者
对于这种情况,如果你只是找不到扩增引物的序列,但是能找到后面所要扩增的序列的话,那么可能还是因为测序引物离你的扩增片断太近。如果不是这种情况,那么可能是你根本没有将扩增片断成功连入。当然还有一种可能是公司测序送错了结果。
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问
小鼠成瘤打完细胞有的长得很快,有的长到100左右就不怎么长了,是什么原因?
汤姆卜丽波
可能和接种量不同有关系,有的小鼠会产生炎症反应吸收肿瘤,然后后面也不长了
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问
小鼠成瘤打肿瘤细胞的时候应该注意什么?
汤姆卜丽波
选择的裸⿏⼀般在4-6周龄,体重16-18g左右,种植部位选择⾎供丰富区域,如腋窝中后部。接种前⽤枪将细胞悬液充分的吹散,防⽌细胞成团⽽降低细胞成活率,并且导致⼩⿏接种细胞数量的差异过⼤。接种时,针头在⽪下进针深⼀点,约1cm深,针头在⽪下左右滑动⼏次,以便细胞接种成团,减少注射后细胞悬液从针眼溢出。
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问
体外转录,模版DNA必须是双链吗,单链DNA可以作为模版吗?
汤姆卜丽波
是以一条含有启动子的链为模板的,但是转录是应该还是要双链
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问
请问制备单(多)克隆抗体和制备亚单位疫苗的过程有什么区别呢?可以根据单克隆抗体筛选出来的抗原表位来设计表位疫苗么?
汤姆卜丽波
可以,我们做的是亚单位疫苗,只是亚单位疫苗相当于抗原的功能
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问
BCA测蛋白浓度时,我的样品比标准品晚了几分钟加,会有什么影响吗
天一湖医者
这个一般来说是不会有什么影响的。
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问
配秋水仙素时,用2%的DMSO来溶解。想知道需要加2%DMSO多少?(只用将秋水仙素溶解就行了吗?还是说用2%DMSO来配制?)
未来9
1.0g/L秋水仙素溶液的配制:称取20 mg秋水仙素,加入8.5g/L NaCl溶液20mL,待完全溶解后,经5.516×104Pa,15min高压蒸汽灭菌后避光保存于4度冰箱中。使用时再用DMSO溶解。
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问
WB显影时,marker也一起被显出强光是什么原因呢,怎么避免?
天一湖医者
可能有以下原因:一抗是单克隆吗?如果不是,那么多克隆抗体时会产生你说的那样的结果的!
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问
qPCR引物设计时,如果primer blast的结果除了目的基因(比如CHS)还有一个预测的CHS基因,那这对引物能用吗
灵枢天问
可以用的,我也有这样的情况,还是可以检测表达的,
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问
双酶切之后,为什么线性化质粒比环状质粒跑得快?
bamboopiggy
如果是完整质粒,应该是超螺旋的,跑的最快。但是感觉你这个lane像是开环带,就是双链dna有一条断开了,拖着尾巴,跑的慢。lane2 是线性带,跑的比开环带要快。
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问
生信结论与临床/基础实验不符合如何解释?
bamboopiggy
生信是基于RNA-SEQ的,是RNA水平的,但是你临床结果是直接看的蛋白水平的,有时候会存在转录水平和蛋白水平不一致的,以能发生疾病的蛋白水平为准。
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问
为什么有一个基因,换了好几个高保真酶,也用了二步PCR(先45℃退火10个循环,再55℃退火25个循环)还是完全没有条带呀
whilt-shirt
有可能是引物问题,建议重新设计引物
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问
广州哪个实验室有液压机可以借用?
未来9
这个你可以询问有类似经验的师兄师姐,看看有什么渠道
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问
WB内参两条带?换内参吗?
秋秋欣欣
可能是胶配得有问题也有可能是样品的问题
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问
QRTPCR结果如何分析
未来9
Ct 值的含义是:每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数 (cycle)。所以不难推断出 ct 值越小,反应扩增到达平台期所需循环数越少,目的基因起始含量越高。下面我们用一个公式进行推导过程:(敲黑板,重点!)PCR 产物量 = 2∧ct * 起始模板量起始模板量 = PCR 产物量/2∧ct = 起始模板量 _2∧ - ct待检基因起始模板量 = PCR 产物量 _2∧ - c
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问
样品几丁质含量过多,会不会影响DNA的提取?
汤姆卜丽波
如果过多的话。是会影响的。多糖的污染是提取核酸时常遇到的一个棘手的问题。植物组织中往往富含多糖,而多糖的许多理化性质与核酸很相似,因此很难将它们分开。在去除多糖的同时核酸也被裹携走了,造成核酸得率的减少;而在沉淀核酸时,也产生多糖的凝胶状沉淀,这种含有多糖的核酸沉淀难溶于水,或溶解后产生粘稠状的溶液。由于多糖可以抑制许多酶的活性,因此污染了多糖的核酸样品无法用于进一步的分子生物学研究。所以必须去除
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问
为什么在做qpcr时会出现bar值过大?所有孔同样方法加入,会有一两个孔无数值出来?
急诊科ys
1.加样不准确。2.试剂室温存放时间过长或加样过程误差!3,系统错误
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问
质粒构建技术过程中遇到的问题?
Junego
质粒提取的试剂盒已经很普遍了,主要是碱裂法+吸附柱,按照试剂盒说明书就可以。抓住一下关键的点:1.菌液新鲜制备:最好挑单菌落培养,4h左右活化后,再接种到试管中过夜培养。2.裂解要充分:菌液和裂解液有一定比例的,不要加太多菌,5mL菌获得的质粒足够克隆用很久(一般可以获得5-10μg)。3.质量控制:看产量和纯度,用Nanodrop定量。纯度的话,OD260/280为1.8-2.0,OD260/2
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问
菌液pcr条带弥散,是什么原因?
Junego
建议加一个阳性对照:可以确定引物、体系、程序是否有问题
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问
质粒构建过程中DNA扩增的问题?
汤姆卜丽波
退火温度可以做个梯度,找到最合适的
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