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        mRNA疫苗,质粒加A尾,怎么构建质粒?

        相关实验:质粒构建技术

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        dxy_j7jezao0

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        4 个回答

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        汤姆卜丽波

        有帮助

        就是基因工程的一部分,获取目的基因,载体。酶切,连接,转化,挑单克隆,验证。

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        bamboopiggy

        有帮助

        mRNA 3’端的PolyA尾巴结构可通过转录模板的设计添加,也 可在转录后通过酶法进行加尾。PolyA尾巴有助于维持mRNA的稳定 性、运输和转译效率,影响着mRNA的半衰期。

        mRNA疫苗的生产流程大致可以分为以下三个阶段:

        DNA 原液的制备:质粒 DNA 扩增通常采用大肠杆菌发酵来扩增。从菌 种复苏开始,质粒 DNA 的生产主要经过发酵培养、收获澄清、精制纯 化、线性化、分装储存等步骤。

        mRNA 原 液制备 : 这一阶段主要是通过体外转录技术( In Vitro Transcription,IVT)以上一阶段的线性 DNA 为模板制备 mRNA。主要 工艺环节包括将线性化质粒 DNA 转录为 mRN、化学修饰(包含 5'端加 帽结构(Cap)和 3'-polyA 加尾结构)、分离纯化、mRNA 原液分装冻 存。

        mRNA 制剂制备:关键的制剂技术突破解决了 mRNA 的成药性问题。 mRNA 制剂的主要工艺环节包括 mRNA 的包封/装载、复合物纯化、除 菌过滤、无菌灌装等:其中,包封/装载工艺的基础是递送系统的设计开 发。

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        天一湖医者

        有帮助

        你参考下这个文章,质粒加A尾,构建质粒。https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=1p270xk0kf470ck07x5608f0g6583520

        user-title

        未来9

        有帮助

        mRNA 疫苗的生产可分为三大阶段,一是 DNA 原液制备,二是 mRNA 原液的制备,三是利用脂质微粒进行包封。

        原液制备开始于质粒构建。通常使用的 DNA 质粒为环状质粒,质粒上含有设计好的序列模块。利用电流打破细胞膜,并将环状 DNA 质粒引入大肠杆菌。大肠杆菌被储藏于含有大量营养物质的溶液中进行繁殖扩增。提取并纯化 DNA 质粒,过滤溶液,去除细菌及其他物质。利用酶将纯化后的环状 DNA 质粒切割为链状。将所得溶液分装冷藏,通过质量控制环节,并运送至下一阶段的生产加工场所。

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