实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问大家做dapi染色常用浓度是多少，0.5-10ug/ml的范围太广了

balalaLy

dapi可以透过完整的细胞膜，跟DNA的结合能力很强，大多数细胞0.1ug/ml就能染上。浓度低一点可以适当延长染色时间，浓度高一点就缩短一下时间，以免过曝。

6 回答1553 围观

问基因组得率比较低，怎么提高？

whilt-shirt

更换进口的成品试剂盒，基本上得率都还可以

4 回答288 围观

问为什么我用QPCR测端粒长度时阴性对照总是出现CT值？而且该CT值和加DNA后的CT相差并不大？

天一湖医者

主要看你的CT值大约是多少，如果很大（大于40循环）那么可以判定结果没有问题，如果跟目的基因的CT一致或者为其他CT值那么判断为模板造成的气溶胶污染或者其他外缘DNA造成的污染。另外你阴性对照加的是水，那么说明你做梯度稀释的时候用的也是灭菌水，这个做荧光定量试验是很不规范的，建议用专门的荧光定量稀释液去做。

3 回答1382 围观

问为什么我在做DNA重组试验的时候，跑出来的条带总是弥散呢

dxy_gwrp7ndq

如果你的marker也有问题,极大可能是你制作凝胶或电泳的缓冲液有问题.请仔细检查是否为1X TE buffer.再次,请使用新鲜的agarose gel进行电泳,如果保存时间过长（即使是在4摄氏度下）,胶体也会出现问题.

5 回答1753 围观

问我用高保真酶扩三个基因，用55度退火只有第一个有条带，然后用62度退火有两个扩出来了，但是出现了特异条带，最后一个一直P不来。

Eason老歌迷

GC含量较高，可以尝试使用GC buffer,或者加入DMSO。另外你的正反向引物Tm 值差的有点大的话可以尝试touchdown PCR ，或者尝试做一下梯度，摸索一下最适Tm。

4 回答523 围观

问质粒提取过程中的问题？

天一湖医者

首先确定下做阳性重组子鉴定的时候是否是两条带,如果是单一条带的话,也有可能出现空载体的情况,有可能是空载体的片段段量小,不易观察

4 回答497 围观

问纯化质粒降解的相关问题？

dxy_n4jex0k8

会不会是溶化质粒的时候没有放冰上？溶得太快且高浓度质粒互相撞击影响质量？如果长时间，比如几年，可以把质粒转进去菌里面，然后-80保存，后期复苏也更方便。

6 回答3136 围观

问求HIF-1α（缺氧诱导因子）对于胶质瘤的具体作用机制

天一湖医者

这个文章写的比较详细，参考一下https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=fb3fa6e6230bebf6527f15e00375c2ec

5 回答369 围观

问各位老师我想问一下WB电流大小是与膜的面积有关吗？这怎么算膜的大小面积？然后用多少ma电流啊？

bamboopiggy

你是说转膜的电流吧？这个和你的机器有关系，和你膜的面积的大小关系不大，你买的是湿转的，还是半干转的？问买的业务员，可以用多大电流。

3 回答332 围观

问想请教一下各位大佬，胶倾斜是什么原因呀？

bamboopiggy

你灌的不匀，所以积层胶和分离胶之间没有压住

5 回答211 围观

问如何证明三个蛋白能形成三聚体？

bamboopiggy

首先用co-ip，a能拉下b和c来，b能拉下a和c来，c能拉下ab来，然后跑native 胶，三聚体的大小应该是三个蛋白分子量的总和。

3 回答670 围观

问菌液OD值和浓度有线性关系么？

bamboopiggy

在一定范围内，有线性关系。OD600基本就是看菌的浑浊的，来决定能不能进行下一步实验。很少有人看这个线性关系。

5 回答1581 围观

问质粒构建中，怎么在质粒上给基因加A尾？

迟C迟

平末端DNA加A的步骤一般是先纯化PCR产物，加入dATP Buffer，利用Taq 酶在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接TA克隆。

6 回答6055 围观

问DNA跑胶后条带弥散的原因？

bamboopiggy

dna降解了？胶配的不匀？用的buffer有问题？这些都是可能的，你要一项一项的排除。

4 回答4812 围观

问PCR中的CT值问题

balalaLy

逆转录酶反复冻融或者使用过程中没有确保在冰上进行会使酶活性降低，内参的CT值会升高，导致实验结果出现相反的方向。

4 回答578 围观

问挑取单克隆时重组单克隆有没有一定的特点，和空质粒不一样的那种

Eason老歌迷

单克隆筛选是根据细胞所具有的特性将单个细胞从混合的细胞样品中分离出来的⼀种技术，是抗体制备细胞株优化、稳转细胞株构建、药物靶点筛选等应⽤中重要的⼀环。具有以下特点:通用性筛选：适用于多种细胞，无需携带抗性荧光标签。单列线性模式：适用于高价值细胞。提供克隆性证据：可为每个克隆提供克隆形成图像。温和的微流控技术：更高存活率，更低损失率。

6 回答401 围观

问怎么对snp位点引入酶切位点，该点所在序列没有对应的酶切位点怎么办

Eason老歌迷

重组时选择你的目的基因上没有，而质粒的多克隆位点上有的酶切位点，一般重组质粒需要两个酶，所以你要选择两个酶切位点，注意尽量避免使用切出平末端的酶。重组引物设计时首先你要确定你选择的两个酶在的酶切位点在质粒的多克隆位点上的排列顺序，这个不能错，不然序列就会接反。一般设计重组引物的时候，在上游引物5’端前面加上载体多克隆位点排列在前面的酶切位点序列，在下游引物5‘端前面则加上后面的一个酶切位点，酶切位

4 回答1633 围观

问关于植物悬浮培养的几个问题

bamboopiggy

现在有那种一次性的，细胞滤网，你可以直接买，尽量别用镍网了，反复处理太麻烦。你可以用移液枪吸了细胞，直接抵在滤网上过滤就好。镍网要洗干净后高压灭菌。培养基需要参见参考文献，因为具体不知道你养的什么。看培养瓶的浑浊度。离心留下的细胞多，静置损伤的细胞多，还是要看你的实验目的。你可以把你的组织放到无菌的离心管里称量，然后把组织放到无菌的瓶里后，再称量一下控的离心管，就知道组织重量了微孔滤膜是高压蒸汽灭

3 回答670 围观

问我合成了一段序列，公司送来了液体状态的质粒，我做了转化，两天才长出来一个菌落，这个正常吗？

汤姆卜丽波

测一下质粒浓度，然后估计是抗性平板没选择对。

9 回答1020 围观

问ELISA板条相关问题？

未来9

1、应该用ELISA试验专用板子。细胞培养板是不行的。ELISA专用板条，是经过处理的，要求每孔的均一性要好；而细胞培养板同样经过处理，但是是为了细胞更好地贴壁生长，使用细胞培养板可能会造成孔与孔之间的显色没有可比性。所以，细胞培养板可以做要求不严格的定性ELISA实验，而其他情况，应当使用正规ELISA板条。2、细胞培养板用于定性或要求不是很高还可以清洗后重复利用；对于定量试剂最好用酶标板，可以

4 回答1111 围观

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