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        为什么我用QPCR测端粒长度时阴性对照总是出现CT值?而且该CT值和加DNA后的CT相差并不大?

        相关实验:定量PCR技术

        user-title

        羊羊羊叉会儿腰

        刚开始以为是操作污染问题,换了好几个人操作还是这样。然后又想是不是引物设计的问题,更换引物后问题也没解决。求大神赐教

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        3 个回答

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        主要看你的CT值大约是多少,如果很大(大于40循环)那么可以判定结果没有问题,如果跟目的基因的CT一致或者为其他CT值那么判断为模板造成的气溶胶污染或者其他外缘DNA造成的污染。另外你阴性对照加的是水,那么说明你做梯度稀释的时候用的也是灭菌水,这个做荧光定量试验是很不规范的,建议用专门的荧光定量稀释液去做。

        user-title

        未来9

        有帮助

        当出现这种阴性对照有CT值,也能分为两种情况去考虑:

        (1)通过观察融解曲线,NTC 与目的基因融解曲线峰形不重叠。一般 NTC 的 Tm 值较目的基因 Tm 值小。这种情况下,NTC 的Ct值是由引物二聚体造成的,并不影响目的基因 Ct 值的采集。

        (2)NTC与目的基因融解曲线峰形重叠。NTC的Tm值等于目的基因的Tm值。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        出现ct值,可能是引物的二聚体,也可能是你的水就污染了,所以换谁做都一样,最好是重新开封所有试剂

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