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        如何证明三个蛋白能形成三聚体?

        相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

        user-title

        dxy_2zab2bz8

        如果三个蛋白:A与B互作,B与C互作,A与C互作,怎么用co-ip证明它们能形成三聚体?求大神指导。

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        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        首先用co-ip,a能拉下b和c来,b能拉下a和c来,c能拉下ab来,然后跑native 胶,三聚体的大小应该是三个蛋白分子量的总和。

        user-title

        未来9

        有帮助

        可以使用WB,看看用你的蛋白抗体检测,看又没有条带,再跑一个SEC来测聚集体的

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        co-ip是很简捷的方法,可以算初步证明。

        two-hybrid是分子生物学上的证明。

        Cross-linking是化学证明。cross-linking就是水溶性用缩合剂(EDC)将非共价键结合的复合体用化学键连起来, 在变性胶下不会离解。由于复合体是in close proximity,在低浓度的edc状态下,复合体的亚基间发生化学偶联的机会比游离的蛋白高。偶联后,会产生一个大的不可离解的复合体。当初发现核糖体就是这么发现的。采用蛋白晶片和抗体晶片也行,原理与co-ip相同。跑非变性胶,复合体也有可能离解。用gel-filtration (Sephadex,Spephacryl)也行,但样品量要求很大。

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