qPCR实验平行的孔总是重复性很差，该怎么改进呢？加样时有推荐的先后顺序吗？

每个孔加的量很低，要留意一下有没有把样品都完全打出去了，枪头上有没有残留

qPCR实验平行的孔总是重复性很差可能是取材不严格，基因表达往往是有时空特异性的，同一处理下不同的样本取材部位或取材时间不一致会导致检测结果差异很大。 同一实验设计的所有样本需取材部位/时间完全一致。

同一个样品，用同一根白枪尖加，中途别换枪尖。先加样品，后加酶和引物的mix

加样就按照顺序加就可以了，主要是加样量要准确，移液器精确一点，枪头加一个换一个