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        石蜡包埋的样品如何检测miRNA?

        相关实验:组织和细胞内miRNA丰度的检测实验

        user-title

        多多益善2013

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        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        有试剂盒啊,你直接买个试剂盒来提取就可以。你直接在搜索引擎里搜:石蜡包埋样品 miRNA 提取 既可以找到。

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        市面上有一些试剂盒可以提取miRNA,后面就和正常qpcr一样,也可以直接用荧光原味杂交技术。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        石蜡包埋的样品检测miRNA

        完整性: RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE 电泳缓冲液;150v,15 分钟)检测完整性。由于石蜡包埋组织福尔马林固定和包埋过程中一般由于RNA 与蛋白反应交联会导致RNA 断裂或者降解,一般电泳后UV下只能看到模糊弥散(smear)带型,随着储存的时间越长,降解断裂越严重,甚至只能看到峰值仅仅在100bp 左右的模糊条带。这都属于RNA 提取正常情况。

        纯度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯。

        浓度:取一定量的RNA 提取物,用RNase-free 水稀释n 倍,用RNase-free 水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280 测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40。

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