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        加尾法逆转录miRNA的qPCR如何区分前体和成熟体?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

        user-title

        广咣咣1109

        在加尾法的时候是否microRNA的前体和成熟体都会加上polyA,并得到cDNA序列模板?在qPCR时,前体和成熟体逆转录得到的模板是否都会参与到PCR扩增当中,从而影响定量的准确性?

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        4 个回答

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        汤姆卜丽波

        有帮助

        前体和成熟体的大小序列都不一样。除非你特别设计不同引物,不会一起扩增

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        加尾法的思路则是先对miRNA进行加PolyA尾处理,改造成mRNA的结构,再采用mRNA常用的oligo (dT)反转录引物进行反转录,从而得到较长的模板链。

        只要是你的引物不同,那么就可以轻松区别开

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你逆转的时候,用的方法一样,但是你跑qpcr的时候,用到引物不一样啊,可以区分成熟体和前体的

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        利用TaqMan实时分析,设计两套不同的引物组和探针来检测前体和成熟microRNA。对于成熟的microRNA,可以使用茎环结构的引物,对于前体,可以使用常规的引物,因为序列很长。

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