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问
原代细胞培养如何避免细菌感染?
bamboopiggy
规范无菌操作,尤其是取材的动物一定要用酒精泡过,才能拿进超净台。用到的器械一定要高压灭菌
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问
RT-pcr,跑出来是一条直线是什么原因?
迟C迟
一条线说明未起峰,未检测到目的基因。检查模板制备、引物、体系是否有问题。
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问
甘油法制备的感受态,是可以直接用热激转化还是可以电转?
迟C迟
感受态细胞制备方法不影响后续电转,可以用电激法转化。
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问
wb实验有一组内参Gapdh爆不出来
balalaLy
其它样品都出来了,那就说明是样品本身的问题,蛋白量低,或者是你煮蛋白前忘记加蛋白了
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问
qpcr的结果求助?
Eason老歌迷
做的挺好😄。很棒。还是要提醒你一句。设计引物有几个需要注意的点。如下:产物不能形成二级结构。引物长度一般在15~30碱基之间。G+C含量在40%~60%之间。引物自身不能有连续4个碱基的互补。引物5′端可以修饰,引物3′端不可修饰。引物3′端要避开密码子的第3位。等
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问
求助|荧光定量这样的结果是不是意味着目的基因未表达
dxy_dfr562pw
如果操作和引物探针确定没问题的话,应该是没表达啥目的基因了……
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问
关于RNA纯度的问题?
天一湖医者
不可以,因为RNA纯度包括样品的纯度和自身的完整性。
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问
OD260/OD280的值出现NAN/INF是什么意思
天一湖医者
NAN无效数字INF无穷大说明有问题,建议重新试试。
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问
大佬看一下,细胞是否污染了霉菌
天一湖医者
从图片看是污染了,看着像酵母污染 。
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问
最近细胞一直污染,基本都是这种,请问这是什么污染,怎么处理
balalaLy
细胞污染属于概率问题,很难搞清楚是属于哪种污染,直接弃掉最省时省力
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问
求问这是真菌污染吗?
天一湖医者
看着是真菌污染,一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。
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问
肺克 pfge 条带模糊跑不出来
天一湖医者
从这张图上看,加样孔不是太亮,你加的细菌的量可能有点少,就是细菌的浓度有点低,如果切开的话,很多条带也会很模糊;.可以设置对照孔,加酶和不加酶的,同时设置多组时间酶切,以节省时间;
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问
某个氨基酸缺失对蛋白功能影响可以用什么软件预测下致病性
迟C迟
可用NCBI的子程序预测蛋白结构,还有UniProt、SWISS、 STRING、ProtParam等数据库都可以试试。
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问
求教:HL-1细胞空泡
bamboopiggy
一开始的细胞空泡,可能是细胞老化的原因,传代过程中,这些细胞会死掉。后面小RNA干扰出现的空泡,可能跟你的转染试剂有关系。至于买细胞,你可以找那家公司在国内的代理帮忙买。
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问
qpcr和RT PCR在定量定性上面有什么区别?
Eason老歌迷
RT-PCR是PCR的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为cDNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物,使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。实时PCR属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。他俩相结合,能用微量的RNA来找出特定时间细胞组织内的特别表达的遗
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问
发文章时pcr实验要哪些原始数据
Eason老歌迷
可能需要你的原始图片,甚至还有荧光定量的数据。或者一些溶解曲线,之类的。
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问
有没有大佬知道PCR 突然扩增不出产物是什么原因?
Eason老歌迷
可能是以下原因导致的,你可以看看模板DNA是否被降解,引物浓度是不是合适,自己再那个说明书的浓度范围再设置一个范围去摸索一下。或者你的引物设计是不是合适。
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问
我想问下有人做过RNA核质分离实验吗?
Eason老歌迷
我们也遇到过类似情况。我们觉得可能是由于实验中操作或者其他原因导致核泄漏了,细胞核内的物质到了胞质中。
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问
做了一次,因为我的细胞增殖速度很慢,培养24h基本没有增殖。所以我铺板的细胞密度挺大的,每孔undefined10五次。铺板后第二天换低血清培
balalaLy
你的药物会干扰cck8的结果,加cck8之前最好还是要洗一下。如果药物促凋亡效果明显的话可以不做饥饿处理。
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问
关于随机引物反转录的一些问题
Eason老歌迷
你想纯化,但是发现没有过滤掉短的,是这样吗?我有一个方法,可以试一试。1. 20μLPCR产物加入5 μL 5M的NaCl(终浓度0.5 M)。2. 加入25 μL 24%的PEG8000溶液(终浓度12%);混匀。3. 4度放置30 min。4. 4500 g,4℃离心30 min 后,立即将板反扣在厚的吸水纸上,离心至150 g,去除上清。5. 加入70 μL 75%EtOH,4500 g,4
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