• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        小鼠椎间盘蛋白提取完毕后煮沸变性为什么会有沉淀?

        相关实验:动物 DNA 提取实验

        user-title

        迪迪迪迪123

        1. 蛋白提取:RIPA(鼎国强裂解液),磨碎后裂解20分钟;
        2. 浓度检测:nondrop 测定浓度为40+
        3. 雷根上样缓冲液(5X)
        4. 煮沸10min,上样量在7ul左右。内参很淡
        5. 第二次上样,煮沸5min后,还有沉淀,涡旋后减少,再次涡旋。减少。

        求助内参为淡是因为大量的蛋白没用溶解么? 这个沉淀的问题怎么解决。

        大迷惑: 为什么看到很多药理学毕业论文中,大家都不做椎间盘的WB和PCR。 都用动物验证效果,然后细胞验证机理?

        wx-share
        分享

        4 个回答

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        这种情况有可能是裂解不完全导致的

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        蛋白质变性后,分子结构松散,不能形成结晶,易被蛋白酶水解。蛋白质的变性作用主要是由于蛋白质分子内部的结构被破坏。天然蛋白质的空间结构是通过氢键等次级键维持的,而变性后次级键被破坏,蛋白质分子就从原来有序的卷曲的紧密结构变为无序的松散的伸展状结构(但一级结构并未改变)。所以,原来处于分子内部的疏水基团大量暴露在分子表面,而亲水基团在表面的分布则相对减少,至使蛋白质颗粒不能与水相溶而失去水膜,很容易引起分子间相互碰撞而聚集。

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        蛋白质变性一般都会导致蛋白质沉淀,蛋白质在高温变性的过程中结构发生变化。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        内参淡是因为上样的蛋白少,可能椎间盘的蛋白不好提,你可能需要优化实验方案。至于做的人少,可能大家都是参考前人,前人不做,也就想不到要做吧

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序