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问
公司定的pcr引物如何验证是否合适?
丁香清香
可以用于正式实验的引物必须满足以下条件:a溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为PCR产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,miRNA染料法检测时,溶解曲线的峰的位置可能在75度附件b琼脂糖电泳为明亮的一条带,条带一般在100bp以上,如果设计引物时PCR产物在100bp一下,需要仔细辨认是否为引物二聚体;引物二聚体的条带一般在50b
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问
CRISPR全基因组慢病毒文库感染细胞后,检测每种gRNA感染细胞个数,提细胞基因组后,PCR时需要加多少量?
秋秋欣欣
只要细胞量足够,根据试剂盒操作手册来做就可以。
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问
核酸浓度和所含碱基数有关系吗?
秋秋欣欣
核酸浓度和所含碱基数没有关系的
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问
qpcr
丁香清香
熔解曲线可以检验扩增反应的特异性,因此是qPCR实验的必需步骤
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问
免疫组化切片保存问题
balalaLy
用中性树胶封片可以放室温长期保存
4 回答
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问
小白问,如何把活细胞和碎片分离开来?
whilt-shirt
可以用percoll分离,活细胞和细胞碎片密度不一样,离心后的层数也不一样
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问
qpcr的引物应该有什么网站或者工具可以检查它的扩增效率吗?每次设计的都不太好用
balalaLy
引物设计的软件在设计过程中就有引物质量的评价反馈,也可以到pubmed上blast一下
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问
WB一抗和内参的区别
balalaLy
要先理解什么叫内参。GAPDH跟你的目的基因一样,都是细胞中表达的某种蛋白,只不过GAPDH在诸多细胞中都有表达且表达量不容易受其它因素的影响,所以被用来作为参照,就是内参的意思
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问
384孔板,rt-qpcr实验结果的处理?
balalaLy
跟96孔板的处理一样啊,只是工作量大了而已
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问
蛋白质和三氯乙酸/苦味酸的反应原理?
bamboopiggy
蛋白质和三氯乙酸的反应是不可逆的。生物碱是植物中具有显著生理作用的—类含氮的碱性物质。凡能使生物碱沉淀,或能与生物碱作用产生颜色反应的物质,称为生物碱 试剂 。如鞣酸、苦味酸和磷钨酸等。当蛋白质溶液pH值低于其等电点时,蛋白质为阳离子,能与生物碱 试剂 的阴离子结合成性盐而沉淀。溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀,其中以三氯醋酸的作用最为灵敏而且特异
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问
肺微血管内皮细胞分离
秋秋欣欣
⼀般情况下,应⽤2 g/L的Ⅰ型或Ⅱ型胶原酶消化20 min~30 min。在某些情况下,需要再采⽤1 g/L 胰蛋⽩酶/0.1%EDTA溶液进⾏⼆次消化,但总消化的时间应控制在30 min以内,以减少微⾎管内⽪细胞的损伤。消化后的组织悬液需要⽤⾎清终⽌酶活性,并将组织悬液通过200⽬的⾦属筛去除未消化组织。
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问
细胞计数和铺板
balalaLy
可能你前后计数的时候没有再次混匀,导致误差。传代不需要计数那么准确的,有些细胞多有些地方少是因为你铺板的时候没有晃匀
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2438 围观
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问
求助/SD大鼠肌肉肌梭电镜图 急急急
秋秋欣欣
可以文献以及网上数据库查看看。
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问
免疫组化定位问题求助
bamboopiggy
你用的抗体是哪个货号?那个公司的抗体有好几个货号,看他们染肿瘤细胞,核也很干净
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问
TCGA数据库筛选MSI-H肿瘤样本
秋秋欣欣
在TCGA的GDC里面就可以直接搜索
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问
小鼠的脾脏做流式需要用到淋巴细胞分离液吗
yanlai000
我们一般都要淋巴细胞分离液密度离心,能裂红最好
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问
为什么有时候pcr产物在凝胶电泳的时候跑不出加样孔?
不下雨的早晨
胶凝固的时间不够久 ,电泳液用太多次,存在蛋白污染
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问
求助:在利用响应面分析时是否考虑细胞增殖的问题?
秋秋欣欣
在利用响应面分析时应该要考虑细胞增殖的问题,会对结果有影响。
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问
羧甲基纤维素钠的粘度?
whilt-shirt
暂时没有有关CMC-Na在灌胃方向对于粘度指标得报导。一般的,建议在保证溶解度的前提下,选择粘度尽量小的CMC-Na。文献中一般在 1500 mPa.s 以下
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问
有没有适合新手做的生信综合实验
天一湖医者
可以尝试一下h1n1流感病毒分析.
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