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        求WB大佬指导向下图这样子的蛋白条带改如何更改孵育条件,才能跑出来好看到的条带?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        before19

        求WB大佬指导向下图这样子的蛋白条带改如何更改孵育条件,才能跑出来好看到的条带。图片描述

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        4 个回答

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        这种情况有可能是一抗浓度太高,导致抗体非特异性结合。

        降低一抗浓度。

        洗膜的时间和次数不够,导致其他蛋白没有清洗干净。

        提高洗脱时间和频率。

        封闭物用量不足。

        提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜。

        封闭物使用不当。

        检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭。

        封闭时间不够。

        室温37度封闭1小时以上,4度封闭过夜。

        一抗稀释度不适宜。

        对抗体进行滴度测试,选择最适宜的抗体稀释度。

        一抗孵育的温度偏高。

        建议4℃结合过夜。

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        增加洗膜次数和时间,增加封闭时间,降低一抗浓度试试

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你把条带的上面留的稍微宽一点 ,然后抗体加匀,洗膜的时候。少量多次

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        你的条带不明显,背景还有些脏。可以适当增加蛋白上样量,封闭不要过长,使用单克隆抗体更好。

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