WB如何将β-actin内参做齐
大科科儿
做了好久的WB，内参总是出现很多情况，双条带，缺条带，大小位置不对，要不就是不齐，每次重新测BCA也不行，求有经验的同学们帮帮忙，给些建议，谢谢啦！
比如这个内参，这样的情况，还有
这个下面的条带按照marker指示是35kDa的大小 ，不知道为什么会出现这样的情况,真的很苦恼，拜托大家如果有建议分享一下，非常感谢啊!
6 个回答
天一湖医者
有帮助
胶浓度不对，不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差，可以调整浓度。
抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度，延长孵育时间。
balalaLy
有帮助
蛋白定量不一定就很准的，最好是提蛋白的组织量或者细胞数相差不大的前提下做定量。
汤姆卜丽波
有帮助
内参不齐，说明你在蛋白定量时不准确，没有把所有的样品都稀释成一致的浓度，若有未变性的样品建议重新定量变性，可换一种定量方法，比如BCA蛋白定量法。若没有样品了，可根据你的内参结果调整上样量，等内参基本一致的时候，做出来的目的条带才有说服力。
whilt-shirt
有帮助
BCA定的是总蛋白量，不是actin的量，一般是用image J校准内参
秋秋欣欣
有帮助
大小位置不对及多条带，有可能是你转膜的时候是不是移动了胶，或者你的抗体是多克隆抗体。蛋白样品测浓度调平，等质量等体积上样。
bamboopiggy
有帮助
拿到样品，先跑一下actin，然后根据actin的灰度值调整上样量
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