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问
TRUST试验中VDRL抗原包含哪些成分?各起什么作⽤?
天一湖医者
心磷脂:与反应素结合: 卵磷脂:加强心磷脂的抗原性:胆固醇:增强抗原的敏感性。三者按适当比例配制的乙醇溶液。EDTA 防止抗原变性(半年内),氯化胆碱灭活待检血清中补体。
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问
请问用CCK-8测定细胞增殖率过程中,饥饿处理后加入药物进而检测添加药物后不同时间点的细胞增殖情况,饥饿点如何确定?
bamboopiggy
饥饿的时间点取决于你什么时间饥饿,什么时间加药物,需要根据你的药物来确定。
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问
wb实验求教
Eason老歌迷
你转膜时间不够,大蛋白比较难转,时间可以稍微延长,我用的湿转都是180ma,120分钟,完全能转上嘎嘎清楚。
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问
内参actin灰度值总是不齐是为什么呢?总是两边的条带更深,中间几条条带更浅
bamboopiggy
感觉是你转膜的原因,转膜的夹子中间可能松了,所以转过去的少
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问
PCR跟WB验证同一个靶点问题
inventbiotech
结果不一定一致,从转录到蛋白还有很长的路,各种调控,PCR检测mRNA高了,蛋白未必就会高,两种调控系统,当然如果是外源表达的可能一致性还是有的,受内部调控低两者可以一致
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问
求助/fluo-8am染料会淬灭吗?
Eason老歌迷
会。光照射是致荧光淬灭的最常见原因,光照射也会促进激发态分子与其他分子相互作用而引起碰撞,使荧光淬灭。溶剂种类、pH值及温度等环境条件的不同也会让淬灭发生。
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问
求助 细胞培养
Eason老歌迷
不是细胞污染,我感觉像是一层死细胞。
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问
颗粒细胞
Eason老歌迷
如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消化。3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,
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问
A549细胞形态判断,用于TGF诱导EMT
Eason老歌迷
不太好,怎么感觉里面细胞老化挺多的呢?
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问
心肌细胞的形态对吗?
Eason老歌迷
细胞形态变了,可能是所用的培养液用的时间太久,里面的必须营养成分谷氨酰胺缺失------配制好的培养液在4度冰箱放置两周后,大部分谷氨酰胺就已破坏,在缺少谷氨酰胺时会出现细胞生长不良等现象。以前我养的细胞也出现过纤维化 变脏等现象,我换成新鲜培养基后它就变好了。也可能是PH值不合适。比如原来生长条件是一个PH,现在改变较大。还有可能是传代时细胞密度太小.有些细胞在相互接触状态下长得比较好。
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问
PAS染色求助
Eason老歌迷
感觉是你的染色不均匀导致的,因为正常应该都会有的。
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问
求助 | 给药之后p-Akt变化不明显,t-Akt表达减少明显
Eason老歌迷
我也遇到过,实际实验和预想实验结果不同,甚至相反,建议你多做几个重复,看看是不是偶然事件。
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问
滑膜成纤维细胞培养1w+视野里是啥
Eason老歌迷
可能是胶原纤维。半月板损伤后滑膜细胞,成纤维细胞,间充质细胞,沿裂隙边缘充填,以肉芽组织形式修复,在一定生物应力作用下变成致密原结缔组织,部分成纤维细胞转化成软骨细胞,细胞合成分泌胶原蛋白,糖蛋白类复合物,形成胶原纤维和基质。
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问
ECL检测后胶片显影之后曝光,胶片上面没有蛋白,原因有什么啊,压片10min,显影定影2min,胶片上什么也没有
inventbiotech
先确认蛋白是否转到了膜上,转膜后用丽春红染色可以检验,转膜后的胶可以用考马斯亮蓝染色,看看胶上是否还有蛋白,通常情况下,胶上还有蛋白的概率是很大的。每一步都有质控步骤,然后推导,找到原因是关键
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问
一直长不出噬斑,有无懂行大佬了解此类情况
Eason老歌迷
所用细菌是否正确?也就是是否是lamda噬菌体的宿主菌。NZY top是否够好?温度太高?浓度也就是营养不行?PH对么?培养时间是否足够长?培养温度是否合适?噬菌体活力是否够,也就是文库保存不当的话,噬菌体已经没活力了。测测,增大噬菌体的量再培养看看。培养的时候,适当将噬菌体和宿主菌先放37°孵育半小时,也许会好一点,增加粘附,侵入。
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问
双荧光素酶测定目的基因的突变体不受某个调控基因的影响
Eason老歌迷
我觉得还是用cmv启动子比较好。
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问
为什么我的细胞提取液中没有检测到目的蛋白?
inventbiotech
首先要考虑你的目标蛋白,他是在细胞的什么位置表达,是内源表达还是外源表达,丰度如何,外源表达要考虑他是否表达了。就是确认你的蛋白在你的样品里。再考虑蛋白提取的问题,目标蛋白没检测到,可能是蛋白提取时没提取到,这样就肯定检测不到了,你的目标蛋白如果是内源的,估计丰度不高,还可能不定位在胞质这些普通蛋白提取方法可以搞定的,可以考虑柱式法总蛋白提取。还有如果是丰度低,可以考虑针对目标蛋白所在亚细胞位置,
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问
为什么WB蛋白的杂带很多?
dxy_lgbve3zq
两个原因,可能是蛋白降解或者抗体浓度太高,特异性不强。解决办法是尽量冰上裂解,提出蛋白以后立刻煮蛋白使蛋白变性。另外可以适当调整抗体浓度,孵育时间,抗体不好的话需要更换抗体。
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问
加甲酰胺的作用是什么,只加尿素变性可以吗?
Eason老歌迷
尿素和甲酰胺,它们可与碱基间形成氢键。
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问
western blot 实验怎样做内参照?
还在陆上surg
根据样本和目的蛋白分子量选择合适的内参。
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