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问
CRISPR CAS9质粒 T7E1 sanger sequencing TAcloning
bamboopiggy
你可以直接梯度稀释,铺96孔板,挑单克隆。然后得到目的细胞。 只要有knock out T7E1 就能切出条带。你这么混着,送测序,绝对是套峰
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问
怎么排出一抗有没有问题
Eason老歌迷
如果有条带,那么说明抗体没问题。条带太弱可能是你的目的蛋白表达量少,也可能是你的抗体浓度不够。
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问
我做的是小鼠海马组织,4度生理盐水灌注,4%多聚甲醛灌注,沉糖.OCT包埋,-20度切片,但是细胞大部分有空洞
balalaLy
一般说速冻是把组织放进液氮中速冻,我试过,效果并不理想。有同学建议用防冻液可以很好地防止冰晶产生,不会有空洞。你可以试试。
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问
所有WB实验都用总蛋白就可以完成吗?
balalaLy
大部分蛋白是只需要看总蛋白,有些蛋白失活、激活状态分别在不同的地方表达,就得看总蛋白和活化部分的比例,比如NF-kB需要看入核部分和胞浆部分。
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问
壁细胞收集是刮下来好还是胰酶消化好?
天一湖医者
肯定用胰酶消化好,若直接刮可能对细胞造成伤害,影响传代培养,
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问
顺铂带进SPF如何消毒
balalaLy
顺铂溶液本身是无菌处理过的吧,外包装酒精擦拭之后放入消毒后的铁饭盒或者用锡纸包裹,放入传递窗紫外消毒。
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问
蛋白分子量标准品200kD的条带经常分层,如何解决呢?
whilt-shirt
选用浓度更低的胶,比如8%或者6%,marker选10-250kd
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问
请问石蜡切片中所使用的二甲苯是哪一种呢?
bamboopiggy
就是最普通的二甲苯,一般500ml一瓶的那种
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问
不同酪蛋白酶联免疫试剂盒,除了标准品不同外,α和β酪蛋白试剂盒中其他试剂可共用吗
whilt-shirt
理论上是可以共用的,但是要看这些试剂是否一样,最好混一起后再用
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问
慢病毒过夜浓缩后离心30min没有4℃有影响吗?
Eason老歌迷
肯定是有影响的!一定要放在4℃
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问
毕赤酵母表达无条带
汤姆卜丽波
菌落pcr有条带说明不了什么,因为它假阳性率很高,还是要送测序看看重组成功了么,然后诱导转化
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问
novagen镍柱纯化出现问题
汤姆卜丽波
柱子是新的么,把柱子按照说明书洗一下试试看会不会出现白色沉淀
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问
紧急求救 流式测凋亡
balalaLy
细胞太密会影响药物的效果,建议还是重新铺板吧
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问
有哪位同志成骨诱导后茜素红染色是紫红色的,还有黄色的,请问哪些是钙离子呀
汤姆卜丽波
如果你诱导成功了,那钙质结节就会和茜素红反应变成红色,这上面紫红色的就是了
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945 围观
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问
向各位大佬求助,我养的原代小胶质细胞,为什么总是很容易就飘了啊?
balalaLy
可能是消化的方法以及培养条件不是很适宜。
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问
请问为啥金葡涂板的时候会有很多划痕
balalaLy
稀释菌液后再涂板或者使用琼脂糖珠子摇板
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337 围观
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问
如何同时采集得到血清和血浆
balalaLy
如果你是想从同一管血样品中得到血清和血浆,是不行的,只能分开抗凝管和非抗凝管采集。
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1498 围观
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问
顺铂粉末溶解
balalaLy
用DMSO溶解成储存液,之后用助溶剂Tween80和peg400加水稀释
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问
请问灌注后的小鼠做免疫荧光和HE染色的冰冻切片,可以直接液氮速冻后进行OCT包埋吗?不经过脱水处理
balalaLy
常规做法是脱水后放入OCT包埋,冷冻,组织直接放液氮很容易碎。如果怕有冰晶引起片子有空洞,可以使用一种防冻液(具体什么名忘了),做脑组织切片的同学很喜欢用,说效果很不错
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问
3’5’race具体操作步骤与原理
Miracle星
3′RACERACE的实验样本包括总RNA,poly(A)+RNA等。首先根据mRNA3′末端天然存在的Poly(A)尾部设计反转录引物逆转录获得第一条cDNA链。根据已知的cDNA序列设计基因特异性引物(gene specific primer,GSP)合成第二条cDNA链。随后以基因特异性引物(GSP)及正义链3′末端引物作为一对引物,对得到的cDNA链进行PCR扩增,从而得到cDNA的3′端
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