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        为什么用His的抗体 杂出了GST的条带?

        相关实验: GST pull-down 分析

        user-title

        dxy_bz95m657

        图片描述

        第二条泳道是His-A+GST空,第三条泳道是His-A+GST-B,用的是His的一抗,但是杂出是GST蛋白,抗体没问题,之前一直用的,但有时候GST蛋白上样量过高时经常会在α-His中印出较淡条带。

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        3 个回答

        user-title

        小镇少年在学习

        有帮助

        可以考虑换个his的抗体,his抗体也是识别HHHHHH,如果你目的蛋白里面有两三个连续的,然后抗体特异性又不好,也是可以识别的。

        user-title

        Miracle星

        有帮助

        我觉得60KD左右那条带应该是表达菌株的本底表达的,但是确实会被诱导。我也是做GST的表达,现在做的还是不好,但遇到过你这种情况,并且很明显,60KD左右的带在量上超过了我的目的蛋白(也是80-90);并且,有一次,我意外的发现我做的另一个His的蛋白也有这条带(表达菌株相同)

        所以,我觉得这个应该是该菌株本身就有的;

        可能是这个蛋白本身也是诱导型表达,能被IPTG诱导。

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        听说pGEX-4T-1载体表达的蛋白会有His tag表达。GST里是有组氨酸的,但是都是分散的。建议你纯化一下在做wb

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