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        细菌定量荧光标记实验,加入钙黄绿素后直接发荧光,而不是等到细菌生长之后再发荧光来较快的提示细菌有没有生长,怎么调整实验?

        相关实验:悬浮细胞的免疫荧光标记实验

        user-title

        断雨独欢

        使用CAM的荧光效果在细菌接种之后验证细菌的生长情况,与观察菌泥、菌环等现象相比可以缩短实验时长,降低成本,但是在使用钙黄绿素时不知道哪里出现了问题,直接让实验做不下去了

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        1 个回答

        user-title

        Miracle星

        有帮助

        检查一下,是不是步骤有不对的地方?

        钙黄绿素染色步骤

        1、用DMSO制备1 mM 的钙黄绿素溶液,并用PBS将其稀释制成1~50 μM的钙黄绿素溶液。

        2、将1/10细胞培养基体积的钙黄绿素溶液加入到细胞培养基中。

        3、在37℃培养细胞15-30分钟。

        4、用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。

        5、用490 nm激发波长,515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

        a、如果钙黄绿素溶液很难进入细胞,可以使用表面活性剂,如Pluronic F127。

        b、或者您也可以用1/10浓度的Calcein-AM溶液代替培养基。

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