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问
wb出现2个条带怎么回事?
bamboopiggy
可能是抗体不特异,可能是胶的浓度出现问题,也可能是buffer的问题,或者有的蛋白就是两条带,如果LC3B
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问
WB的样品变性后可以在4℃放吗?大概能放多久
bamboopiggy
我放过4度,overnight没问题,估计放一周问题不大
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问
在做ELISA实验中,最后要显色多久可以加终止液进行终止,显色的原理是什么呀?
bamboopiggy
看你用的kit的说明书,一般在kit给的范围就可以。
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问
关于WB灰度值量化为柱状图的疑惑
Eason老歌迷
这两个没啥区别,都可以用。灰度直方图实质就是一个大小为256的数组,数组的下标为0 ~ 255,分别代表了图像采样量化后从0 ~ 255的每个灰度级。计算灰度直方图,其实就是通过遍历图像的每个像素点,统计0 ~ 255的每个灰度级在图像中出现的次数,而统计后的总次数或者归一化后的频率就作为这个数组对应下标的元素取值。
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问
Elias实验问题寻找?
dxy_082oaia6
如果不是偶然现象每次都这样的话考虑捕获抗体和二抗或者检测抗体可能存在交叉偶然现象可能是所用buffer污染
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问
测RNA浓度结果为什么要乘以8
bamboopiggy
1.你用什么方法测的?2.测RNA浓度的目的是作什么?3,如果是做反转录,没有*8这个说法,一般是nanodrop测得浓度值直接用得。
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问
今天跑的wb又歪条带之间也没有分开,是什么原因呢
麻黄连翘赤小豆
歪可能是胶灌的不均匀,没分开可能是跑的时间太短,没跑开
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问
细菌刺激细胞
Eason老歌迷
一般放回细胞培养箱培养,如果你做好消毒,操作得当,一般不会造成污染的。
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问
缬沙坦作用于细胞,用什么试剂溶解合适
Eason老歌迷
看你用什么实验了,如果是mtt,cck8就可以用dmso溶解。如果是加药,用血清培养基即可。你的浓度设定一般是按照你的实验目的来设计的,最好是先预实验,确定一个大概的范围。
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问
用红细胞裂解液裂解人外周血红细胞,离心后没有白色沉淀
Eason老歌迷
第一个问题:红细胞裂解液(Tris-NH4Cl)的配制比例和方法:称取3.735g氯化铵、三羟甲基氨基甲烷(Tris)1.3g加水溶解并稀释至500ml。0.22μm滤膜过滤除菌,4℃保存。细胞悬液加红细胞裂解液后,混匀静止4-5分钟,待红细胞完全破碎,1000r/min离心5分钟,弃上清去除红细胞,得到白细胞沉淀。第二个问题:我觉得你的离心力不够,或者是你提的细胞量太少了。
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问
大家帮忙看看这个中间空泡是什么?
Eason老歌迷
如果不在细胞内在细胞外的话,可能是酵母菌等真菌污染。
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问
求助 siha细胞
Eason老歌迷
我也遇到过这种情况,应该是细胞污染了,你先养养看状态,在做处理。
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问
X-tile数据解读
Eason老歌迷
是的,p值肯定是小于0.05的才靠谱
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问
实验分析题
Eason老歌迷
问题1:减低,共价问题2:周期蛋白依赖性激酶是细胞周期的关键调节因子,通过与细胞周期蛋白D(cyclin D)形成复合物,可磷酸化视网膜母细胞瘤基因(Rb)继而释放转录因子E2F,促进细胞周期相关基因的转录,使细胞进入S期。
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问
请大佬指导一下!好人一生平安!
Eason老歌迷
那你就按照你设计的时间来加,你第一天下午去,下面的就是早晨和晚上来加药。
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问
关于高GC模板(>65%)PCR扩增
Eason老歌迷
PCRx Enhancer Solution有助于扩增GC丰富序列,可以提高引物结合的特异性和Taq酶的热稳定性,并且便于镁离子浓度和退火温度的优化选择。我之前扩增一段GC比70%的序列,可能还有二级结构,用了多个厂家的DNA聚合酶均扩不出条带,改用Platinum Taq DNA聚合酶后,当PCRx Enhancer Solution添加到浓度为3×时得到了很漂亮的结果。
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问
细胞因子干粉重构后的保存时间
Eason老歌迷
一般4℃可稳定储存4-7天,要是存放于-20℃,可稳定保存至少三个月。
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问
从细胞中提取内源性表达的蛋白,按照常规方法做,可是最后银染总是没有条带? 多谢多谢!
天雨心晴
首先要确认的是你的目的蛋白是否有被IP下来。最好用western检测一下IP沉淀中是否含有你要的内源性表达的蛋白,有的话再进一步做银染。银染的上样量可以大一些。当然我觉得可能你在IP的过程中出现问题的几率比较大。
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问
NC 膜 PVDF 膜 尼龙膜的差异。
天一湖医者
NC膜只可以和单链rna.dna在高盐条件下结合,与dna分子非共价键结合,易丢失dna.而且NC膜很脆,易断,不能反复使用,优点是对探针和蛋白质吸附作用较弱,杂交信号本底低。尼龙膜可以与单链及双键多核苷酸链结合,与DNA共价键结合,可以反复利用10到20次,膜强度高,不易破坏,优点是可以重复使用,碱可以促进DNA与尼龙膜的结合。
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问
定量PCR的时候怎么确定cDNA的稀释倍数?
秋秋欣欣
可以做一个梯度稀释,然后qPCR跑一下看
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