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问
我要提不同龄(1至4龄、蛹、成虫)的RNA,各阶段昆虫要如何取样?按重量取还是按头数取?
Dr_劉医生
按头数取,提RNA的组织和每个个体相关,和重量没关系,
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问
wb翻车了,求解答
Dr_劉医生
出现非特异性的杂带可能是抗体纯度不够,高纯度抗体条带特异性更好,建议更换抗体;此外也可以加长BSA封闭时间,和洗膜的时候多洗几次可以降低杂带干扰
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问
市场上的脱脂牛奶可以直接用来封闭吗?
Dr_劉医生
可以用,脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封闭膜,避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。但也只能用WesterBlot,如果要做ELISA或者phage display时候,蛋白铺板的话,不能使用脱脂奶粉。
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问
基因敲除载体的构建
vlinine
觉得先将3个目的基因分别双酶切之后用T4 DNA连接酶连接之后再连接到载体上
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问
荧光定量PCR,可以一个实验组一个cDNA浓度做吗
bamboopiggy
不能一个组一个浓度,cdna的浓度要差不多才有可比性
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问
【求助】实时荧光定量PCR内参基因溶解曲线问题
bamboopiggy
高度不是问题,只要起峰的位置一致就可以。
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问
细胞荷瘤相关问题
bamboopiggy
H226是肺癌细胞系,ovcar-3是卵巢癌细胞系,你可以试试提高细胞数量,一般5-10x10^6试试
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问
灌胃的时候大鼠老是仰卧起坐,拿腿蹬我,有什么好招吗
Dr_劉医生
大鼠戴好手套用拇指和食指固定颈部,一定要用点力;尾巴拉直绕在无名指上,绷住了腿就不会动了
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问
注射小鼠问题
土井挞克树
不建议稀释,这个少量稀释难以改变粘稠,但是稀释液过多会影响小鼠代谢,还是建议换静脉或者改变针头口径
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问
T细胞活化
土井挞克树
首先回答第一个问题,平底的板子肯定没有问题。二,活化方面,首先你要保证你的抗体包被没有问题。抗体包被用无菌 PBS 将 anti-mouse CD3 抗体(克隆号:145-2C11)稀释至 5μg/ml,稀释后的抗体加入到 24 孔板中,每孔 400μl,4°C 包被过夜。(注:板子在加入抗体之前,先用无菌 PBS 润洗 2-3 遍,避免干孔);抗体包被不行肯定影响实验结果其次细胞刺激(次日)扩增
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问
absin gp91 ds-tat
土井挞克树
储存方式:-20°C溶解方式这个可以查一下用该试剂做的文章,文章里一般有写
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问
WB条带
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电泳缓冲液用的次数过多,一般来说电泳缓冲液用过两次以后电泳的效果就会变差
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652 围观
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问
干细胞诱导分化出现的问题
申东熙老伯
会受代数影响,建议使用传代次数小一些的干细胞。
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389 围观
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问
免疫组化用不用TritonX-100打孔有什么区别?
balalaLy
tritonx-100的作用是破膜,所以看你的蛋白表达在哪里,如果是膜表达蛋白不需要打孔,其它的比如胞浆蛋白或者核表达蛋白都需要
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3120 围观
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问
炎症模型可以直接用thp1,而不用pma诱导吗
vlinine
不可以,需要用pma诱导 才能成功构建模型
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963 围观
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问
分子对接分析中,运行autodock后工作目录已经有了.dlg文件,但autodock运行小模块还未结束,需要继续等自动关闭吗?
vlinine
需要继续等自动关闭,以免产生其他影响
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问
腺病毒可以用于大鼠的转染吗?影响吗?
汤姆卜丽波
可以啊,腺病毒是心机细胞转染的最佳选择,所以可能是其他部分出现了问题
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问
maldi-tof-MS测核酸片段
vlinine
需要用已知分子量的寡合苷酸片段作为标准品进行校准
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问
关于拟南芥蘸花侵染的问题
土井挞克树
首先你问题描述的太笼统了,最好放下图片,是从哪一步开始有问题的。摇菌,离心,侵染液配制,遮光侵染,这些步骤都会失败呀
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问
小鼠滑膜成纤维原代提取
balalaLy
胶原酶消化的还好吧,消化完没有用筛子筛吗?好多组织块。不筛的话也可以通过短时间静置之后取上清,去掉沉淀的组织块。
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