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问
wb翻车了,求解答
Dr_劉医生
出现非特异性的杂带可能是抗体纯度不够,高纯度抗体条带特异性更好,建议更换抗体;此外也可以加长BSA封闭时间,和洗膜的时候多洗几次可以降低杂带干扰
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问
市场上的脱脂牛奶可以直接用来封闭吗?
Dr_劉医生
可以用,脱脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封闭膜,避免标记抗体固定在膜上引起背景增高。但也只能用WesterBlot,如果要做ELISA或者phage display时候,蛋白铺板的话,不能使用脱脂奶粉。
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问
基因敲除载体的构建
vlinine
觉得先将3个目的基因分别双酶切之后用T4 DNA连接酶连接之后再连接到载体上
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问
注射小鼠问题
土井挞克树
不建议稀释,这个少量稀释难以改变粘稠,但是稀释液过多会影响小鼠代谢,还是建议换静脉或者改变针头口径
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问
T细胞活化
土井挞克树
首先回答第一个问题,平底的板子肯定没有问题。二,活化方面,首先你要保证你的抗体包被没有问题。抗体包被用无菌 PBS 将 anti-mouse CD3 抗体(克隆号:145-2C11)稀释至 5μg/ml,稀释后的抗体加入到 24 孔板中,每孔 400μl,4°C 包被过夜。(注:板子在加入抗体之前,先用无菌 PBS 润洗 2-3 遍,避免干孔);抗体包被不行肯定影响实验结果其次细胞刺激(次日)扩增
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问
absin gp91 ds-tat
土井挞克树
储存方式:-20°C溶解方式这个可以查一下用该试剂做的文章,文章里一般有写
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问
WB条带
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电泳缓冲液用的次数过多,一般来说电泳缓冲液用过两次以后电泳的效果就会变差
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问
干细胞诱导分化出现的问题
申东熙老伯
会受代数影响,建议使用传代次数小一些的干细胞。
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问
免疫组化用不用TritonX-100打孔有什么区别?
balalaLy
tritonx-100的作用是破膜,所以看你的蛋白表达在哪里,如果是膜表达蛋白不需要打孔,其它的比如胞浆蛋白或者核表达蛋白都需要
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问
炎症模型可以直接用thp1,而不用pma诱导吗
vlinine
不可以,需要用pma诱导 才能成功构建模型
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问
悬浮细胞铺24孔板,明明铺的很均匀,放培养箱几小时后发现中央密度很高,有人知道是什么问题吗
bamboopiggy
没事,这是孔板的边缘效应,尤其你又是悬浮细胞,确实容易中间聚堆,你要是不放心可以用枪吹开
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问
分子对接分析中,运行autodock后工作目录已经有了.dlg文件,但autodock运行小模块还未结束,需要继续等自动关闭吗?
vlinine
需要继续等自动关闭,以免产生其他影响
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问
腺病毒可以用于大鼠的转染吗?影响吗?
汤姆卜丽波
可以啊,腺病毒是心机细胞转染的最佳选择,所以可能是其他部分出现了问题
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问
石蜡切片为什么组织有裂纹
dxy_r1dvnb49
组织太脆了,建议调整一下固定时间
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问
maldi-tof-MS测核酸片段
vlinine
需要用已知分子量的寡合苷酸片段作为标准品进行校准
3 回答
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问
关于拟南芥蘸花侵染的问题
土井挞克树
首先你问题描述的太笼统了,最好放下图片,是从哪一步开始有问题的。摇菌,离心,侵染液配制,遮光侵染,这些步骤都会失败呀
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问
小鼠滑膜成纤维原代提取
balalaLy
胶原酶消化的还好吧,消化完没有用筛子筛吗?好多组织块。不筛的话也可以通过短时间静置之后取上清,去掉沉淀的组织块。
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问
请问一下,这里面有没有自噬小体或者自噬溶酶体
土井挞克树
首先1.电镜下观察自噬体的形态在电镜下可观察到呈新月状或杯状、双层或多层膜、有包绕胞浆成分的趋势的自噬囊泡(autophagic vacuole,AV)。 自噬体(AVi)的特征为:双层或多层膜的液泡状结构,内含胞浆成分,如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体(AVd)的特征为:单层膜,胞浆成分已降解。类似于我觉得你的电镜中是存在的
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问
关于:病毒侵袭实验
土井挞克树
首先要保证细胞浓度合适,太高太低以及与病毒配比不正常都不合适。其次,病毒做成PBS稀释梯度比较好,除非你对配比掌握很高,不然都建议做梯度。再者曾经有同仁温度操作错误,不过这个是小概率事件了。
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问
抗体纯化怎么设计实验方案,用什么方法纯化比较好?
灵枢天问
抗体纯化盐析法 取x ml血清加x ml生理盐水,于搅拌下逐滴加入2x ml饱和硫酸铵,硫酸铵的终饱和度为50%。 4℃,3h以上,使其充分沉淀 离心(3000rpm),20min,充上清,以x ml生理盐水溶解沉淀,再逐滴加饱和硫酸铵x/2ml。 置4℃3h以上,[此时,(NH4)2SO4的饱和度为33%] 重复上述第二步过程1~2次。末次离心后所得沉淀物为球蛋白,以0.02% m
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