实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问请问悬浮细胞能做transwell实验吗，有具体protocol吗？

balalaLy

跟贴壁细胞大同小异（1）悬浮细胞最好在前一天进行饥饿处理（即无血清培养基过夜培养，以便增强细胞迁移能力）；（2）实验当天，收集细胞，离心去上清，用无血清培养基重悬，计数；（3）每组细胞的配制：每组 3 复孔。按照每孔 10^5 个细胞 / 200 μl 的量配制 4 个复孔的用量（多配 1 孔），即 4×10^5 个细胞 / 800 μl；（4）transwell 下室加入 700-800 μl

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问培养幽门螺旋杆菌，培养皿全程一定要倒置吗？不倒置会有什么影响?

dxyc42u

将培养皿倒置培养是为了减缓培养皿内培养基水分的蒸发，也为了方便取用。因为培养皿盖子大而底小，如果正着放，取用时容易只拿到盖子，从而造成平皿内培养基的暴露。而且倒置可以防止在实验过程中，培养皿内的水汽在皿盖上冷凝成水珠滴落到培养基上，将杂菌引入培养基，造成污染，从而影响到培养基中微生物的生长。有时候培养的目标是收集细菌的代谢物，然而代谢物有些会易溶于水，而培养皿正放时候盖上会出现蒸馏水，造成菌落成片

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问安徽医药还需要终审吗？

dxyc42u

安徽医药需要终审的，不过很快的

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问关于超声破碎菌体的一些疑问？

sswei

长时间超声裂解会导致裂解液温度升高加速蛋白降解，同时超声也会导致蛋白质构象的改变，影响蛋白功能。

3 回答1402 围观

问Edu检测中间哪几步可以暂停？（也就是时间延长）做实验鲁莽了实在不想半夜三点来做实验

dxyc42u

最好不要停顿，我们试过停顿的话效果不好

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问构建稳转细胞系

dxyc42u

没高表达低表达之分，pcDNA3.4可以构建稳转株的

3 回答928 围观

问请教大家，我在做vigs沉默的时候，基因没有沉默掉，反而表达量高了很多，为什么？

dxyc42u

沉默基因效率不高时会引起细胞代偿性增多

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问真菌污染

sswei

从镜下看明显是受到真菌污染了。

3 回答445 围观

问过表达稳转细胞株构建问题

huarenqiang5

构建稳转细胞系可以用pcDNA3.4载体。

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问细胞凋亡流式检测问题

huarenqiang5

可能是你的细胞老化死亡太多，产生了太多的细胞碎片。或者是你的血清问题。

2 回答674 围观

问免疫荧光dapi染色求助

balalaLy

dapi这个染料很稳定很容易染色，一般不会有质量问题，应该是冰冻的问题，没有固定好，细胞发生肿胀。

2 回答1620 围观

问求助，流式细胞染色检测cd8+t和iNKT细胞

dxyc42u

可以直接加这两个染料染色的，只要染的好流式一般没啥问题

3 回答342 围观

问Pcpa失眠模型小鼠戊巴比妥钠睡眠实验后还可以作为样本测定指标吗

huarenqiang5

pcpa失眠模型小鼠戊巴比妥钠睡眠实验后同样可以作为样本测定的指标。

2 回答731 围观

问戊巴比妥钠验证小鼠失眠

huarenqiang5

常用的评价方法为巴比妥类药物协同睡眠实验，空场实验和脑电、肌电或眼动监测。

2 回答626 围观

问免疫组化求助

dxyc42u

考虑用的抗体特异性不强导致的，换个抗体试一试

2 回答400 围观

问小鼠肝脏条状白点，有硬化结节，可能是什么病变呢？

huarenqiang5

你这个从图片来看主要考虑是肝硬化结节。

2 回答1740 围观

问T细胞激活问题

dxyc42u

总因子直接刺激效果不理想，包被靠谱些

3 回答546 围观

问免疫组化染色

dxyc42u

第一次做的话建议先搞预实验，做几个片子试一试，后面一个基因搞一张片子

3 回答617 围观

问求助：小鼠原代神经元、小胶质细胞和少突胶质细胞共培养技术

dxyc42u

这是共培养示意图可以看一看。。

1 回答1072 围观

问腺病毒不够用？需要重新包毒吗？

huarenqiang5

这个建议重新进行包装比较可靠。

4 回答388 围观

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