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        蛋白质提取率计算,关于总蛋白和提取液蛋白含量的测定方法?

        user-title

        远方_oe7m

        想要提取一个物质中的某种蛋白质,比如说从茶叶中提取富硒蛋白,我看到文献上是先用凯氏定氮法测定茶叶中的蛋白质含量为总蛋白含量,然后再用考马斯亮蓝法测定提取液中的蛋白质含量,最后,蛋白质提取率=提取液中蛋白含量/茶叶中总蛋白含量。

        为什么总蛋白和提取液中的蛋白含量要用两种方法来测呢?凯氏定氮法和考马斯亮蓝法选一个对总蛋白和提取液中的蛋白进行测定可以吗?

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        2 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,最小可测2.5μg/mL蛋白质,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。

        凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右(12%~一19%),因此,通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质),即: 蛋白质含量=含氮量/16%。

        凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法。据此,需用先后用两种方法。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可以的,提取液中蛋白测定也可以用凯氏定氮法

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