求大佬们分享一份THP1诱导巨噬细胞极化CD86和CD206流式双染protocol！

以下是一份常用的THP-1细胞诱导巨噬细胞极化并进行CD86和CD206的流式双染的实验方案：

材料：

• THP-1细胞（人单核细胞白血病细胞系）

• RPMI 1640培养基（含10% FBS和1% 抗生素/抗真菌剂）

• Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)

• 无血清RPMI 1640培养基

• 流式细胞仪染色缓冲液（例如PBS或FACS缓冲液）

• 非特异性抗体（如人IgG）用作阻断试剂

• CD86荧光标记抗体（例如PE标记的CD86抗体）

• CD206荧光标记抗体（例如FITC标记的CD206抗体）

步骤：

1. 将THP-1细胞在RPMI 1640培养基中培养，并保持在37°C、5% CO2的培养箱中，密度不要过高（建议细胞浓度在0.5-1.0 x 10^6个细胞/mL）。

2. 将细胞分装到培养皿中，并添加PMA（最终浓度为100 nM）刺激THP-1细胞。将培养皿放回培养箱中，细胞培养时间为24-48小时（取决于您所需的极化时间）。

3. 转移THP-1细胞至无血清RPMI 1640培养基中，以终浓度约为1x10^6个细胞/mL。

4. 在每组样品中加入非特异性抗体（如人IgG），以阻断非特异性Fc受体。

5. 将细胞分装到离心管中，离心以去除培养基。使用流式细胞仪染色缓冲液进行一次洗涤。

6. 加入CD86荧光标记抗体（根据厂家推荐的浓度）到各个离心管中，搅拌混匀，并在室温下孵育15-30分钟。

7. 进行第二次洗涤步骤，以去除未结合的CD86抗体。

8. 加入CD206荧光标记抗体（根据厂家推荐的浓度）到各个离心管中，搅拌混匀，并在室温下孵育15-30分钟。

9. 进行最后一次洗涤步骤，以去除未结合的CD206抗体。

10. 重新悬浮细胞，并转移到流式细胞仪样本管中进行流式细胞仪分析。