IPTG 诱导蛋白表达实验

1.外源基因的诱导表达： 1) 用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA和目的基因； 2) 按连接步骤连接目的基因和载体，并转化到转化DH5α感受态细胞中； 3) 分别挑取单菌落接种于5mL LB ( 0.1g·L-1 氨苄青霉素)中，37℃培养过夜； 4) 以2%体积比转接于2ml LB( 0.1 g·L-1 氨苄青霉素)中，37℃继续培养2.5 hr，至细菌对数生长期，加0.1mmol/

包涵体成因是蛋白表达过快，局部浓度过高，具有相互作用的蛋白聚合沉淀。因此避免包涵体方法如下：1、降低诱导温度温度，延长诱导时间（如 16 ℃，16 h）；2、减少诱导剂浓度（0.01–0.1mM）；3、在蛋白前融合进 MBP、TRX 等促溶标签；4、更换弱启动子；5、适当增加盐浓度，在蛋白溶剂中加入 10% 左右的甘油；6、改变诱导剂的类型和浓度：适当调整诱导剂的类型和浓度，如改变 IPTG 浓度