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实验问答23,464,327 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

蛋白质

问DCA曲线问题

sswei

决策曲线分析是一种评估和比较合并临床结果的预测模型的方法，只需要对模型进行测试的数据集，并将其应用于具有连续或二分类结果的模型。因此，从该图形来看，难以做出合理的结论。

3 回答467 围观

问紧急求助四环素诱导系统

loveliufudan

四环素诱导系统一般使用四环素或其衍生物，如强力霉素（Dox）作为诱导剂。脱水四环素盐酸盐也是一种四环素类似物，可以用于诱导基因表达。但是，不同的四环素类似物对tTA或rtTA的亲和力不同，可能影响诱导效果。此外，还要注意细胞培养血清中是否含有四环素或其衍生物，以免干扰系统的调控。

3 回答917 围观

问丙酮固定细胞会掉怎么办

loveliufudan

使用丙酮固定细胞时，需要注意固定时间和温度。固定时间太短或温度太低，可能会导致细胞未被充分固定而易于脱落。此外，使用PBS或者其他缓冲液洗涤细胞时，也需要轻轻摇晃孔板，避免过于强烈的震动导致细胞脱落。除了固定时间和温度，另外一些可能导致细胞易于脱落的因素包括：细胞密度过低或过高，都可能导致细胞易于脱落。转染试剂或细胞培养液的质量问题，可能会导致细胞易于脱落。细胞黏附能力较差或对特定基质无法黏附，也

4 回答912 围观

问求助WB 大分子条带消失的原因？

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因：1）胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应；2）蛋白质降解；3）上样量过多或过少及样品弥散。

6 回答1400 围观

问请教，STAT3和p-STAT3 Western Blot蛋白检测

loveliufudan

通常情况下， STAT3 Western Blot检测所用的蛋白质提取物是包括细胞核、细胞质和细胞膜的总蛋白质。这是因为 STAT3是一种细胞内信号传导蛋白，存在于多种细胞结构中，因此要检测其全局表达水平，需要提取包括细胞核、细胞质和细胞膜的总蛋白质。在文献中，通常报道的是磷酸化状态的STAT3(p-STAT3)含量的变化情况，而不是总的STAT3含量。这是因为STAT3的磷酸化状态是其活性的指示

3 回答5306 围观

问求助289kDa蛋白转膜条件及分离胶浓度

huarenqiang5

289KDa蛋白转膜建议用 4%的浓缩胶，6％的分离胶，湿转140v恒压3h。

3 回答784 围观

问有没有人用DIA-NN搜库的时候一直出现无法识别raw文件的情况啊

土井挞克树

可以下载一个修复的附件，就可以识别了

3 回答680 围观

问wb结果为什么背景比较黑且条带不清晰？

balalaLy

一抗二抗浓度高，或者洗膜不充分，适当调低抗体浓度，增加洗膜时间，或者提高洗膜液中tween20的浓度

6 回答13621 围观

问ERK、JNK WB条带趋势

huarenqiang5

想要验证对MAPK信号通路的影响，建议做磷酸化的WB比较好。

3 回答1898 围观

问有没有做过cell free表达蛋白的大神！

sswei

无细胞技术（cell-free）蛋白质表达上的应用，作为近年来单独列出的蛋白表达系统，主要用于表达膜蛋白等难以在细胞内获取的蛋白。膜蛋白在细胞间联系、表面识别、细胞骨架接触、信号传导、酶活性及物质运输中扮演了重要角色。由于其具有多种细胞功能，膜蛋白是非常理想的药物靶标。但是，膜蛋白的其复杂的优化过程使得纯化非常困难并且耗费时间。无细胞技术可以用来来获得高得率的可溶性的膜蛋白。在无细胞技术无细胞技

3 回答739 围观

问血小板测蛋白可以直接冻吗

土井挞克树

短时间可以，时间长蛋白质会变性所以不建议。

5 回答391 围观

问western blot 相关实验

huarenqiang5

考虑以下几点原因：①. 因为蛋白上样量低或目的蛋白在来源组织或细胞中的表达量并不丰富造成。可适当加大蛋白上样量，也可通过提高抗体稀释度或采用灵敏度更高的发光底物来调整，如Enlight-plus。②. 蛋白没有充分转移到膜上。转膜后可通过预染Marker判断转膜效率，也可用丽春红染膜、用考马斯亮蓝染胶，判断转膜效率。③. 抗体效价不高，用量不足，孵育时间太短，或抗体反复使用保存不当而失活。可考虑更

5 回答510 围观

问COIP实验中INPUT无目的蛋白，pulldown中能砸到目的蛋白，why？

huarenqiang5

主要考虑以下几点：（1）样品中目的蛋白未表达或者表达量低。这种情况下建议确定目的蛋白的蛋白谱，确定它会表达。（2）可以适当增加裂解液，但要注意后续要将裂解液去除干净。（3）抗体使用量少，没有足够的抗体去捕获目的蛋白。建议增加抗体的使用量。（4）缓冲液、洗脱液的pH可能不能将目的蛋白洗脱。建议根据想要洗脱的蛋白质，调整溶液正确的二pH值。（5）抗体没有与免疫吸附磁珠结合。注意查看磁珠与抗体亚型是否

4 回答1070 围观

问请教一下各位老师关于ROC曲线位于参考线以下的问题

汤姆卜丽波

Roc就是该指标下的生存面积，原数据才是最准确的改动了后面的数据都对不上了

3 回答1544 围观

问HL-60和NB4细胞诱导分化问题

群青2

我们做下来是0.5 uM浓度诱导大概4-6 d就有效果了呀？

5 回答681 围观

问类器官病毒包装进行稳转后续不需要药筛吗？

土井挞克树

稳转后不需要做药物筛选了，前期做就可以了

3 回答183 围观

问求助贴，WB检测BV2细胞中TLR4的表达一直跑不出来

sswei

无条带的原因很多，要逐一排除哦，比如：抗体用错，转膜出错，抗原无表达，试剂失效等，都会导致空白条带。

4 回答1095 围观

问请问一下，问什么蛋白表达中，集菌破碎之后，液体是黄色的，而且过完分子筛之后，跑胶之后，条带还是很杂？

loveliufudan

蛋白质表达过程中，液体颜色的黄色可能是因为存在大量的细胞裂解产物或者富含色素的蛋白质。条带杂乱的问题可能是由于目标蛋白质表达量较低，或者存在其它杂质蛋白质或者表达产物。为了解决这些问题，您可以考虑以下几点：优化菌落培养条件以提高目标蛋白质表达量。在破碎细胞时使用更加彻底的方法，如超声波或高压均质等方法，以确保细胞完全破裂释放蛋白质。使用更加纯净的蛋白质分离方法，例如磷酸盐缓冲液（PBS）或甘氨酸盐

5 回答527 围观

问请问一下透析袋前处理一般是直接用水煮沸10分钟就可以吗

土井挞克树

是的，煮沸消毒，少数的需要进行抗凝处理

5 回答4482 围观

问ROC曲线联合后面积反而小了？

loveliufudan

当联合诊断时，ROC曲线面积小于某个单独指标的ROC曲线面积，可能是由于联合诊断的方法不当，或者指标之间存在一定的相关性。以下是可能的解决方案：检查联合诊断方法是否正确。在联合诊断中，可能需要使用特定的计算方法，如逻辑回归、支持向量机等。如果方法不当，可能会导致ROC曲线面积的下降。检查指标之间的相关性。指标之间存在一定的相关性可能会影响ROC曲线的面积。在这种情况下，可以使用因子分析或者其他方法

3 回答2023 围观

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