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        求助贴,WB检测BV2细胞中TLR4的表达一直跑不出来

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        nan18

        1.提取蛋白跟正常提取蛋白的方法一致

        2.封闭两个小时,一抗使用CST家的TLR4 1:1000稀释,二抗也是1:1000稀释但是最后裁70kd以上发现没有特异性条带,像图中这样,想问一下大家有人跑出来的条件有什么不一样吗?或者需要注意什么?

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        4 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        无条带的原因很多,要逐一排除哦,比如:抗体用错,转膜出错,抗原无表达,试剂失效等,都会导致空白条带。

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        有可能是抗体的原因,CST的抗体有时候会出现问题

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        做预实验的时候跑出来了么,如果确定有的话,那有可能是抗体的问题,换个抗体试试

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是一些可能导致您未能在BV2细胞中检测到TLR4表达的原因:

        检测方法不准确:如果您使用的抗体不能很好地识别TLR4蛋白,则会导致未能检测到特异性条带。您可以尝试使用其他抗体或更改抗体浓度。

        细胞裂解不彻底:如果细胞裂解不充分,则无法从细胞中完全释放出蛋白质。这可能会导致您未能检测到TLR4蛋白。您可以尝试增加裂解时间或使用其他裂解缓冲液。

        蛋白质含量不足:如果细胞中TLR4的表达量很低,则可能无法检测到蛋白质。您可以尝试使用更多的细胞或增加抗体浓度来提高检测的灵敏度。

        免疫印迹条件不适当:如果您的免疫印迹条件不正确,则可能会影响到您的结果。您可以尝试更改膜的孵育时间、温度和抗体浓度等参数,以优化免疫印迹条件。

        其他原因:还有其他一些因素可能会影响免疫印迹的结果,例如抗体交叉反应、过度饱和和传递效率等。因此,您可以尝试使用其他抗体或更改免疫印迹实验流程。

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