求助WB 大分子条带消失的原因？

主要考虑以下几点原因：

1）胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应；

2）蛋白质降解；

3）上样量过多或过少及样品弥散。

转的时间不够或者转太久，没转上

转印效率低了，可以延长时间，注意冰浴降温

有可能是蛋白未分离开或者条件不对

大分子条带消失的原因可能有多种，以下是一些可能的原因：

蛋白样本浓度太低：如果蛋白样本浓度太低，那么在电泳或转膜过程中可能无法充分加载足够的大分子蛋白，从而导致大分子条带消失。

标记物浓度太低：如果标记物浓度太低，那么在电泳或转膜过程中可能无法充分加载足够的标记物，从而导致大分子条带消失。

蛋白样本结构特殊：一些大分子蛋白可能存在特殊的结构，如高度糖基化、高度磷酸化、高度烷基化等，这些结构可能会影响电泳或转膜的效率，从而导致大分子条带消失。

电泳或转膜条件不合适：电泳或转膜条件不合适可能会导致大分子条带消失。例如，电泳电流或电压过高可能会导致大分子蛋白迁移不完全或聚集在凝胶顶端，从而导致大分子条带消失。

凝胶制备或储存不当：凝胶制备或储存不当可能会导致凝胶质量下降，从而导致大分子条带消失。例如，凝胶老化或受到氧化作用可能会导致凝胶的孔隙度下降，从而使大分子蛋白无法进入凝胶内部。

针对这些可能的原因，可以考虑优化蛋白样本浓度、标记物浓度、电泳或转膜条件等，以及确保凝胶制备和储存过程中的质量控制。同时，也可以尝试使用其他方法检测大分子蛋白，例如基于质谱的蛋白质组学方法。

大概率是Western转膜液中甲醇浓度不恰当。