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        COIP实验中INPUT无目的蛋白,pulldown中能砸到目的蛋白,why?

        相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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        EchoHQH8

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        4 个回答

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        huarenqiang5

        有帮助

        主要考虑以下几点:

        (1)样品中目的蛋白未表达或者表达量低。这种 情况下建议确定目的蛋白的蛋白谱,确定它会表达。

        (2)可以适当增加裂解液,但要注意后续要将裂解液去除干净。

        (3)抗体使用量少,没有足够的抗体去捕获目的蛋白。建议增加抗体的使用量。

        (4)缓冲液、洗脱液的pH可能不能将目的蛋白洗脱。建议根据想要洗脱的蛋白质,调整溶液正确的二pH值。

        (5)抗体没有与免疫吸附磁珠结合。注意查看磁珠与抗体亚型是否匹配。

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        土井挞克树

        有帮助

        可能是你的蛋白存在降解,所以检测不到

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        在COIP实验中,INPUT是用来作为背景对比的样品,用于确认在免疫共沉淀(pull-down)步骤中检测到的目的蛋白是否是特异性结合的。因此,INPUT样品中并不含有目的蛋白。如果在pull-down步骤中检测到了目的蛋白,说明该蛋白与与某些结构或蛋白复合物相互作用,并与免疫沉淀剂相互作用,从而被成功沉淀下来。这通常是因为目的蛋白在细胞中存在于蛋白复合物中,或者与其他结构或蛋白质非特异性相互作用导致的。因此,在分析pull-down结果时,需要进行合适的对照实验,以区分特异性和非特异性结合。

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        蛋白表达量低,input做不出来,经过IP富集后蛋白浓度高了,可以杂出来。提高input蛋白量

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