实验问答22,272,540 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问为什么慢病毒保存在-80℃无反复冻融，滴度持续显著下降？

假象KFFL

可能是冻存温度太低导致滴度持续显著下降，还有会不会是冻存病毒的液体出现问题。

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问WB样品没有条带？是怎么回事？

dxy_mqg1dtg8

出现WB样品没有条带的情况可能有以下几种可能的原因：蛋白质含量过低：WB的检测需要一定的蛋白质含量才能够进行，如果样品含量太低，则可能无法检测到条带。在样品制备时，可能需要增加样品量或调整蛋白提取条件，以获得足够的蛋白质含量。蛋白质迁移问题：WB的条带生成需要经过蛋白质电泳和膜上转移两个步骤，如果蛋白质没有完全迁移到膜上，则可能会导致条带不清晰或者没有条带。在蛋白质电泳过程中，需要确保电泳条件的稳

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问求教！生孢梭菌活性

土井挞克树

传代时细菌密度要合适，过多过少都不好，其次要给细菌适应时间，适应期后再进行实验

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问求助酿酒酵母衰老实验

sswei

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问质粒在DH5α里长，但在DH10α里不长呢？

土井挞克树

降低庆大霉素和四环素的浓度再培养。

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问WB显影

loveliufudan

可能是由于几种原因引起的：蛋白质表达量过低：如果您的样品中的蛋白质表达量很低，显影出的条带就可能很弱。这可能会导致您需要更长时间的曝光才能获得足够的信号。您可以尝试增加样品的加载量来解决这个问题。酶标记的抗体活性下降：如果您使用的抗体活性下降，也可能导致显影后的条带较虚弱。确保您使用的抗体存储在适当的条件下，并且没有过期。如果您在显影前准备了较长时间，也可能会影响抗体的活性。尽量减少抗体的预先混合

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问求助T-cell adoptive transfer 细胞过继转移

loveliufudan

T细胞过继转移，也称为T细胞移植或T细胞免疫治疗，是一种基于体外扩增和转移自体或异体T细胞的治疗方法。该方法可以增强机体的免疫系统对癌细胞、感染和自身免疫性疾病等的作用，同时也是一种重要的实验手段用于研究免疫细胞的生物学和免疫学。在老鼠中，T细胞过继转移可以在多种免疫缺陷和疾病模型中使用。常见的操作方法是从供体老鼠中收集T细胞，并通过体外刺激、扩增和激活来增加它们的数量和活性。然后将这些T细胞转移

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问求问：顺铂溶解问题

loveliufudan

Sigma品牌的顺铂粉末在溶解后，有时候会出现黄色颗粒沉淀，这是由于顺铂分子的结构和化学性质导致的。在4°C低温下保存，这种沉淀是正常的现象，不会对药效产生影响。在使用前需要将其加热使其完全溶解，一般可以使用37°C水浴锅或者将溶剂加热至50-60°C进行溶解。在加热过程中，尽量避免过高的温度或过长的时间，以免影响顺铂的稳定性和活性。需要注意的是，在顺铂的使用过程中，还需要遵守相关的安全操作规范，

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问CO-OP细胞裂解

z流沙z

有可能会降解一些，但如果全程都在冰上应该还好

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问求教奇奇怪怪的WB

sswei

有以下几点原因：①预处理时未将膜完全均匀地浸透PVDF膜使用前要用100%甲醇浸透膜；有些NC膜需要甲醇浸湿，而有些NC膜不需要甲醇处理，只需要用转膜buffer浸透，具体根据所购买的NC膜说明书操作。②靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH值可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液(pH10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液。③甲醇浓度过高过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离，从而沉淀在凝胶中，同

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问有80kd的wb内参吗

z流沙z

没有额，常见的是actin43，GAPDH36，tubulin55，如果跟目的蛋白十分接近，可以先孵目的蛋白，然后采用一抗去除液，再孵内参

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问【求助】甲醇破坏抗原抗体结合的原理

loveliufudan

免疫亲和层析柱的洗脱液通常会使用一些有机溶剂（如甲醇、乙腈等）来破坏抗原和抗体之间的非共价键结合，以实现对目标蛋白的洗脱。在甲醇和乙腈中，甲醇的极性较低，通常比乙腈更强地破坏非共价键的稳定性。同时，甲醇也更容易从水相中除去，因此它通常被用作免疫亲和层析柱的洗脱液。然而，在使用高浓度甲醇（如90%甲醇）洗脱时，由于甲醇的极性较低，容易造成蛋白质和抗体的表面结构变化，进而破坏它们之间的相互作用力和结合

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问做WB显影时，有背景色是为什么，跟二维码一样。

balalaLy

可能是蛋白表达本来就比较低，另外tbst洗的次数太多了，建议提高tbst中土温的浓度，减少洗的次数

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问重组蛋白加入到细胞中

z流沙z

不建议，最好还是使用同一种属，免得被人质疑

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问coip中发现IgG的条带比ip组的还粗一般是什么原因

z流沙z

主要就是一些非特异性的结合，可以多洗一下珠子，也可以使用磁珠

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问求助，ELISA试剂配置怎样操作能够充分混匀啊？

z流沙z

如果是管子可以涡旋振荡，如果是瓶子可以上下颠倒混匀，一孔有值一孔没值，一般是加样问题，加样后用枪头轻柔混匀，或者轻轻拍打侧壁

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问ELISA 实验求助|阴性血清和阳性血清OD值差距不大怎么办

土井挞克树

你的单抗特异性没那么好，也有可能是你包被抗体的活性不行；建议提高包被浓度试一试，或者提高单抗浓度。

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问蛋白组学应该注意什么事项，好研究吗

loveliufudan

在进行蛋白组学研究时，需要注意以下事项：样品的质量和纯度：样品的质量和纯度对于蛋白组学研究至关重要，因为污染物或其他非目标蛋白质可能会干扰分析的准确性和灵敏度。因此，在采集、处理和保存样品时，需要严格控制污染、避免蛋白质的降解和氧化，并采用适当的方法和技术提高样品的纯度和稳定性。实验设计和样品处理：在进行蛋白组学研究时，需要仔细设计实验和样品处理流程，以确保研究结果的可靠性和重复性。比如，需要选择

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问ELISA可以检测SASP

loveliufudan

ELISA可以用于检测SASP中的某些成分，例如细胞因子等。具体来说，可以使用特异性的抗体来检测特定的细胞因子等成分。然而，由于SASP是一个复杂的混合物，其中包含多种不同的蛋白质和其他生物分子，因此需要选择适当的ELISA试剂盒和抗体，并且需要进行仔细的优化和标准化，以确保ELISA的灵敏度和特异性。此外，需要注意SASP的动态变化，即SASP的成分和水平可能会随着时间和刺激条件的变化而发生改变

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问WB检测磷酸化蛋白的疑问？

loveliufudan

1.通常在检测磷酸化蛋白的电泳实验中，上样量的选择应该根据所用的样品种类和磷酸化蛋白的表达水平来确定。一般来说，上样量会在10-50 μg之间，但也可以根据需要进行优化。如果表达水平较低，可以考虑使用富集技术或增加上样量，而如果表达水平较高，则应注意避免过度载入以避免产生饱和效应。2.对于出现杂带的问题，可以尝试以下几种方法进行解决：优化抗体浓度：可以通过调整一、二抗的浓度比例，或者减少一、二抗的

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