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实验问答23,445,373 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

蛋白质

问求问：顺铂溶解问题

loveliufudan

Sigma品牌的顺铂粉末在溶解后，有时候会出现黄色颗粒沉淀，这是由于顺铂分子的结构和化学性质导致的。在4°C低温下保存，这种沉淀是正常的现象，不会对药效产生影响。在使用前需要将其加热使其完全溶解，一般可以使用37°C水浴锅或者将溶剂加热至50-60°C进行溶解。在加热过程中，尽量避免过高的温度或过长的时间，以免影响顺铂的稳定性和活性。需要注意的是，在顺铂的使用过程中，还需要遵守相关的安全操作规范，

3 回答1549 围观

问CO-OP细胞裂解

z流沙z

有可能会降解一些，但如果全程都在冰上应该还好

4 回答514 围观

问求教奇奇怪怪的WB

sswei

有以下几点原因：①预处理时未将膜完全均匀地浸透PVDF膜使用前要用100%甲醇浸透膜；有些NC膜需要甲醇浸湿，而有些NC膜不需要甲醇处理，只需要用转膜buffer浸透，具体根据所购买的NC膜说明书操作。②靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH值可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液(pH10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液。③甲醇浓度过高过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离，从而沉淀在凝胶中，同

3 回答356 围观

问有80kd的wb内参吗

z流沙z

没有额，常见的是actin43，GAPDH36，tubulin55，如果跟目的蛋白十分接近，可以先孵目的蛋白，然后采用一抗去除液，再孵内参

3 回答763 围观

问【求助】甲醇破坏抗原抗体结合的原理

loveliufudan

免疫亲和层析柱的洗脱液通常会使用一些有机溶剂（如甲醇、乙腈等）来破坏抗原和抗体之间的非共价键结合，以实现对目标蛋白的洗脱。在甲醇和乙腈中，甲醇的极性较低，通常比乙腈更强地破坏非共价键的稳定性。同时，甲醇也更容易从水相中除去，因此它通常被用作免疫亲和层析柱的洗脱液。然而，在使用高浓度甲醇（如90%甲醇）洗脱时，由于甲醇的极性较低，容易造成蛋白质和抗体的表面结构变化，进而破坏它们之间的相互作用力和结合

2 回答926 围观

问做WB显影时，有背景色是为什么，跟二维码一样。

balalaLy

可能是蛋白表达本来就比较低，另外tbst洗的次数太多了，建议提高tbst中土温的浓度，减少洗的次数

4 回答553 围观

问重组蛋白加入到细胞中

z流沙z

不建议，最好还是使用同一种属，免得被人质疑

3 回答393 围观

问coip中发现IgG的条带比ip组的还粗一般是什么原因

z流沙z

主要就是一些非特异性的结合，可以多洗一下珠子，也可以使用磁珠

3 回答944 围观

问求助，ELISA试剂配置怎样操作能够充分混匀啊？

z流沙z

如果是管子可以涡旋振荡，如果是瓶子可以上下颠倒混匀，一孔有值一孔没值，一般是加样问题，加样后用枪头轻柔混匀，或者轻轻拍打侧壁

3 回答753 围观

问ELISA 实验求助|阴性血清和阳性血清OD值差距不大怎么办

土井挞克树

你的单抗特异性没那么好，也有可能是你包被抗体的活性不行；建议提高包被浓度试一试，或者提高单抗浓度。

3 回答820 围观

问蛋白组学应该注意什么事项，好研究吗

loveliufudan

在进行蛋白组学研究时，需要注意以下事项：样品的质量和纯度：样品的质量和纯度对于蛋白组学研究至关重要，因为污染物或其他非目标蛋白质可能会干扰分析的准确性和灵敏度。因此，在采集、处理和保存样品时，需要严格控制污染、避免蛋白质的降解和氧化，并采用适当的方法和技术提高样品的纯度和稳定性。实验设计和样品处理：在进行蛋白组学研究时，需要仔细设计实验和样品处理流程，以确保研究结果的可靠性和重复性。比如，需要选择

3 回答632 围观

问ELISA可以检测SASP

loveliufudan

ELISA可以用于检测SASP中的某些成分，例如细胞因子等。具体来说，可以使用特异性的抗体来检测特定的细胞因子等成分。然而，由于SASP是一个复杂的混合物，其中包含多种不同的蛋白质和其他生物分子，因此需要选择适当的ELISA试剂盒和抗体，并且需要进行仔细的优化和标准化，以确保ELISA的灵敏度和特异性。此外，需要注意SASP的动态变化，即SASP的成分和水平可能会随着时间和刺激条件的变化而发生改变

3 回答1672 围观

问WB检测磷酸化蛋白的疑问？

loveliufudan

1.通常在检测磷酸化蛋白的电泳实验中，上样量的选择应该根据所用的样品种类和磷酸化蛋白的表达水平来确定。一般来说，上样量会在10-50 μg之间，但也可以根据需要进行优化。如果表达水平较低，可以考虑使用富集技术或增加上样量，而如果表达水平较高，则应注意避免过度载入以避免产生饱和效应。2.对于出现杂带的问题，可以尝试以下几种方法进行解决：优化抗体浓度：可以通过调整一、二抗的浓度比例，或者减少一、二抗的

3 回答935 围观

问800MS曝光以后看到背景很杂连对照也有杂背景，红框的是对照，这是什么原因呢？

z流沙z

这还算可以，主要就是抗体的非特异性结合。可以延长封闭时间，室温2-3h，另外抗体可以用5%BSA或者脱脂牛奶来配制

3 回答286 围观

问wb煮蛋白的时候有沉淀怎么办？

loveliufudan

如果煮蛋白的时候出现沉淀，可能是因为溶解缓冲液中的成分不足以完全溶解蛋白质，或者在蛋白质溶解过程中发生了其他问题。下面是几种可能的解决方法：加强溶解缓冲液的成分：尝试加入更多的溶解缓冲液，或者加入额外的溶解剂（如尿素、甘油等）以帮助蛋白质溶解。增加煮沸时间和温度：将煮沸时间和温度增加一些时间或提高温度，以帮助蛋白质充分溶解。过滤蛋白溶液：使用0.22微米的滤膜过滤蛋白溶液，以去除杂质和沉淀。更换新

3 回答2112 围观

问有没有做个磷酸化的大神遇到过这种情况呢？只出来两三个组，同一批蛋白同个牌子的一抗，另一个指标能出来，这个指标只能出来一俩个组

z流沙z

首先有存在条带，证明整个实验基本上没有问题。至于条带弱或者有的没有条带，有可能是刺激因素不够导致蛋白没有发生磷酸化，也有可能是蛋白上样量不够导致没有显现出来，因为看着背景也比较脏，可以增加上样量和抗体浓度，注意用BSA封闭

3 回答208 围观

问奇怪的wb。

loveliufudan

这种结果可能是由于交叉反应引起的。可能存在某种共同的表位或蛋白质结构，使得一些抗体可以结合到多个不同的分子上。在这种情况下，一些不特异的交叉反应可能会发生，导致一些意外的结果。对于您所描述的情况，一抗可能存在少量的别的抗体，这些抗体可能与actin结合，从而导致actin的信号出现。当使用正确的二抗时，这些交叉反应可能会被抵消，因此actin的信号可能会消失，而目的蛋白的信号会显示。需要进一步注意

3 回答690 围观

问ELISA

z流沙z

不一定，看读值大不大，有时候可能只是一些非特异性的背景

3 回答455 围观

问蛋白质与糖学

z流沙z

纯化的目的是提纯，过程中会有损失，如果还有浓缩的话可能量会增多

3 回答337 围观

问怎么看免疫共沉淀的图，求助

z流沙z

lysate就是相当于普通wb，检测在细胞中转染过表达的所有蛋白是否表达，然后加入珠子和相应抗体进行富集IP，看看目的蛋白和靶蛋白之间是否相互作用，或者目的蛋白是否影响靶蛋白的泛素化水平。图中的一片smear就是泛素化条带

3 回答1391 围观

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