有没有做个磷酸化的大神遇到过这种情况呢？只出来两三个组，同一批蛋白同个牌子的一抗，另一个指标能出来，这个指标只能出来一俩个组

首先有存在条带，证明整个实验基本上没有问题。至于条带弱或者有的没有条带，有可能是刺激因素不够导致蛋白没有发生磷酸化，也有可能是蛋白上样量不够导致没有显现出来，因为看着背景也比较脏，可以增加上样量和抗体浓度，注意用BSA封闭

可能是由于以下原因：

磷酸化水平低：如果磷酸化水平非常低，可能只有一两个组能够检测到磷酸化信号。可以尝试使用更加灵敏的检测方法，如超敏感ECL试剂盒等，或者优化实验条件来提高检测灵敏度。

抗体问题：如果抗体的特异性或亲和力存在问题，可能会导致只有一两个组能够检测到磷酸化信号。可以尝试更换抗体或者调整抗体的浓度。

样品处理问题：样品处理方式可能会影响磷酸化信号的检测。例如，可能需要优化蛋白质的提取方法、蛋白质的电泳分离条件、转膜条件等。

实验操作问题：实验操作可能会对磷酸化信号的检测产生影响。例如，可能需要注意蛋白质的转移时间、电泳分离时的电压等。

首先你的图片背景太糊了，这个抗体建议更换，特异性太差了