实验问答22,042,588 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问蛋白质电泳的loading buffer中甘油含量会影响分子量结果吗？

汤姆卜丽波

Buffer里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔，一般不会影响结果。

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问审稿意见“选题内容不新颖”接下来怎么办

sswei

提到一些类似研究:研究不够新颖,相比某研究没什么不同。那就去了解这些提到的研究,比较出自己的创新之处。

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问不知道该投什么杂志，怎样按照编辑的意思去修改论文

sswei

准确选择期刊步骤：1、列写期刊清单：根据论文的研究主题和内容，检索同类或相似论文的发表情况，将检索结果列成期刊清单（含论文题目、发表时间、作者单位、姓名及期刊名称）。2、完善期刊清单：仔细搜集清单中期刊资料，完善期刊清单内容：在清单中补充期刊的类别（SCI（分区）、EI检索、EI会议、CSCD、北大核心、科技源核心、普刊等）、审稿/出版周期（初审、复审、录用到见刊等时长）、费用（审稿费、版面费）、

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问审稿人提的问题或修改意见不明白

sswei

首先，诚恳的态度是至关重要的，提交文章修改后要附上一个cover letter。里面包含这些内容：感谢编辑安排审稿以及审稿人提出的宝贵意见。因为你们的建议，经过修改后的文章变得更好，读者们可以获得更有价值的信息。再次感谢编辑和审稿人的帮助。虽然cover letter的内容也都是客套话，但是编辑跟审稿人看着也会舒心不少。即便有时因为研究方向不是很一致，他们有的问题有点业余，又或者提意见时比较不客气

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问论文写作，专业语句的翻译不顺畅，如何快速优化？

sswei

1.阅读10篇文献，总结100个常用句型和常用短语，记得要经常复习。注意文献作者必须是以英文为母语者，文献内容要与你的专业有关。2.找3-5篇技术路线和统计方法，与你的课题接近的文章进行精读。写出论文的草稿，要按照标题、作者、摘要、背景、目的、材料、方法、结果、讨论、致谢、参考文献、图例、图、表、照片和说明的统一格式来写。这样做的好处是从它可以方便地改成任何杂志的格式。3.针对论文的每一部分，尤其

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问敲低过表达

loveliufudan

选择敲低或过表达目标基因的方法可以从以下几个方面考虑:1. 效率和稳定性:慢病毒系统效率高,可得到稳定敲低或过表达细胞株;siRNA敲低 temporary。2. 负责制:病毒系统可能对宿主细胞有影响,需评估安全性。siRNA影响较小。3. 细胞类型:对难转染细胞,病毒系统转导效率较好。siRNA可用于多种细胞。4. 作用方式:siRNA主要下调mRNA水平,对编码蛋白水平影响有延迟;病毒系统可直

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问求助！蛋白大小在7kda左右做WB的转膜电压还有时间应该在多少啊

汤姆卜丽波

一般转膜的电流在200mA-400mA之间，转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。小片段的可以用250mA。

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问【求助】ELISA检测A549细胞上清炎症因子含量，浓度太低

汤姆卜丽波

这种情况，先要分析一下你的阴性对照设定的是否正确，再一个问题是标准曲线怎么样？标准曲线很好的话，分析零孔的OD值是否也是接近样本孔，如果接近的话，可能你的样本里该指标含量很低或者没有，细胞是接种于 6 孔板，培养至 85% 后，将细胞随机分组

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问WB 奇形怪状的条带

loveliufudan

可能原因有:1. 蛋白样品制备不当:蛋白降解、变性不完全等会造成条带形态异常。2. 电泳条件不当:电压过高、电泳时间不足等会使条带形状畸形。3. 转膜不均匀:转膜缓冲液配制不当, transferring不平稳都会影响。4. 印迹效果差:孵育时间不当,洗膜不充分,会导致背景高、条带形态差。5. 抗体问题:抗体亲和力弱、浓度不足,都可能形成条带畸形。6. 显色问题:底物配制不正确,孵育时间过长等。7

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问求助：WB出现双条带，部分条带不显示

sswei

抗体的原因：不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异，大部分都能检测到目的条带，但是有时能检测到非特异性的条带；蛋白亚型表达的原因：做WB经常会发现，一种蛋白有时检测压型很明显，有时不是很明显。参考了很多文献的结果，均有此种情况出现，即使是大家都觉得很确定的蛋白很多时候也会出现不同的亚型。毕竟对很多蛋白认识有限。这种情况不要怕的，尽管按照真实结果去处理，千万不要为了让结果好看或者符合大家的意思而去做修

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问跑胶气泡

飞跃迷雾1

看看是不是缓冲液的问题，也有可能是玻璃板没有洗干净

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问蛋白质冻干

飞跃迷雾1

低温的环境下蛋白的结构就很容易改变，可能会影响蛋白的功能，所以冻干是要加保护剂的，不同种类保护剂的功能会不太一样，那么我们先来看一下常用的冻干保护剂主要分为五大类：一、PH缓冲剂，蛋白稳定性受ph的影响较大，在选择缓冲液大ph时候，尽量不要接近蛋白质的等电点，以避免蛋白的聚集，tris、组氨酸、柠檬酸盐在冷冻干燥过程中会显示较小的ph变化，一般选择的buffr溶液的ph为5.8-8.0即可。二、填

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问泛素化连接方式

loveliufudan

1. 直接通过WB比较确定泛素化方式有以下局限性:(1) WB不能明确区分不同连接方式的泛素化。(2) 泛素化不一定导致靶蛋白降解,连接方式不同对蛋白表达量的影响可能不同。(3) 需要抑制蛋白酶体活性,否则被泛素化标记的蛋白可能已被降解。2. IP确定泛素化方式的优势:(1) 可以分离不同连接方式的泛素化蛋白。(2) 明确鉴定泛素化部位和类型。(3) 不依赖于蛋白降解,直接检测标记状态。(4) 结

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问WB情教求助，加了四个样本，目的条带出现了六个（额外的两个是最左边marker孔和

sswei

可能的原因：1.样品本身纯度不够；2.所用的溶剂（例如loading buffer）含有蛋白质污染；3.目的蛋白发生降解，杂带实际是目的蛋白的分解肽段

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问求助蛋白跑胶出现奇怪现象

sswei

1.样品太浓了2.样品中含有溶解性不好的东西

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问求助 wb跑组织actin有marker无蛋白条带

huarenqiang5

电泳液漏的几点建议:①与供应商协商，提供低颜基比涂料，以便调整槽液。②加强前处理液的过滤，降低磷化液的残渣含量，严格控制磷化后冲洗的水质，以及浮在工件表面上的磷化残渣;定时清洗挂具疏松污垢等。③加强电泳槽液的过滤。定期清洗、更换过滤装置，严格控制槽液的PH值和碱性物质的带入，防止树脂析出。

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问蛋白纯化buffer 变浑浊求助

汤姆卜丽波

肯定有影响的，你纯化出来的蛋白跑胶看看大小对不对，有没有杂带，浑浊的就不要用了，下次注意操作时避免污染

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问救命，为啥两张膜都出现了这样的情况？是同一个槽的两张膜都这样，是膜本身的问题，还是都没有转过去？

loveliufudan

分析建议如下:1. 由于两张膜结果一致,问题很可能出在转膜这一步。2. Marker 能显示表示转膜系统本身没有问题,膜也成功激活。3. 目标蛋白可能转移不足,原因可能是:(1) 转膜电流过小,蛋白转移效率低(2) 转膜时间不够,应适当延长(3) 转移缓冲液配方问题,可调整pH、增稠剂等4. 建议重复转膜,适当增大电流,延长时间,确保蛋白有效转膜。5. 转膜后可用Ponceau S染色检查膜,确

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问WB中actin有很多非特异性条带，排除了不是封闭液和一抗的问题，如下图，左右两边是marker

dxy_mqg1dtg8

在Western blot中出现非特异性条带，可能有以下几个原因：1. 蛋白质样品中存在其他蛋白质：如果蛋白质样品中存在其他蛋白质，这些蛋白质可能与actin结合并形成非特异性复合物。因此，为了避免这种情况的发生，可以尝试使用纯化的actin标准蛋白或者使用更高的浓度的actin一抗。2. 蛋白质样品中存在丰富的actin：如果蛋白质样品中存在大量的actin，可能会导致actin与其他蛋白质结合

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问什么时候用酶标仪？什么时候用分光光度计检测？为什么有些比色法测蛋白用酶标仪，有的就用分光光度计。

huarenqiang5

1、酶标仪可用于测定酶的活性，如葡萄糖磷酸酶和脂肪酶，用于检测细胞代谢活性。紫外分光光度计可用于测定荧光物质的浓度，如荧光素、荧光素酶和荧光素纳米颗粒，用于研究蛋白质、核酸和其他生物分子的结构和动力学。2、酶标仪可用于测定DNA和RNA的浓度和纯度，用于进行DNA和RNA的基因组研究、PCR扩增和DNA测序等实验。紫外分光光度计可用于测定蛋白质的浓度和纯度，用于进行蛋白质的表达研究和质谱分析。3/

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