求助 wb跑组织actin有marker无蛋白条带

电泳液漏的几点建议:

①与供应商协商，提供低颜基比涂料，以便调整槽液。

②加强前处理液的过滤，降低磷化液的残渣含量，严格控制磷化后冲洗的水质，以及浮在工件表面上的磷化残渣;定时清洗挂具疏松污垢等。

③加强电泳槽液的过滤。定期清洗、更换过滤装置，严格控制槽液的PH值和碱性物质的带入，防止树脂析出。

可能目的蛋白没有表达出来，虽然PAGE胶上有蛋白

分析及建议如下:

1.胶凝固不良可能是APS过量或TEMED比例不足导致,优化配胶条件。界面的纵向纹路也提示凝胶问题。

2.电泳仪漏液会造成泳道不均匀,需要检查并修复仪器。

3.转膜条件影响较小,按现有参数即可。

4.没有条带显示可能是一抗问题,需要重新优化一抗的工作浓度。现用1:40000可能过高,降低稀释度。

5.提高一抗结合效果,可考虑漂晚3-5%BSA封闭,延长一抗孵育时间等。

6.同时建议做内参如GAPDH来确定问题出在目标蛋白而不是方法本身。

7.其它各步骤如洗膜、显色等条件也需核查是否合适。

8.重复试验,同时准备阳性对照可排除操作问题。

综上,优先从配胶条件和一抗效果两个方面着手优化,其他环节也需要逐一检查。希望这些建议可以提供帮助,也祝实验顺利!