【求助】ELISA检测A549细胞上清炎症因子含量，浓度太低

这种情况，先要分析一下你的阴性对照设定的是否正确，再一个问题是标准曲线怎么样？标准曲线很好的话，分析零孔的OD值是否也是接近样本孔，如果接近的话，可能你的样本里该指标含量很低或者没有，细胞是接种于 6 孔板，培养至 85% 后，将细胞随机分组

针对ELISA检测样本中细胞因子含量过低的问题,有以下几点建议:

1. 接种密度一般选择1-5x10的5次方个细胞/ml,六孔板接种1-2ml/孔为宜。密度过低会导致分泌的细胞因子过少。

2. 培养板以六孔板或12孔板为好,瓶口表面积太大不利于累积细胞因子。

3. 培养基加入低血清或无血清培养基,减少血清因子的干扰。

4. 在细胞充分贴壁和生长后再实验处理,并收集充分时间的上清(24-48小时)。

5. 收集上清时离心去细胞,防止损伤影响检测。

6. 上清样品可以适当浓缩后再检测。

7. 优化ELISA试验操作,如抗体稀释度、孵育时间等。

8. 正对照品做标准曲线定量,确保ELISA试验灵敏度足够。

按照上述要点调整细胞培养条件,并优化ELISA检测方案,可以提高样品中细胞因子的检测灵敏度。

建议使用96板孔，接种浓度为 5×103 个/孔。