WB 奇形怪状的条带

可能原因有:

1. 蛋白样品制备不当:蛋白降解、变性不完全等会造成条带形态异常。

2. 电泳条件不当:电压过高、电泳时间不足等会使条带形状畸形。

3. 转膜不均匀:转膜缓冲液配制不当, transferring不平稳都会影响。

4. 印迹效果差:孵育时间不当,洗膜不充分,会导致背景高、条带形态差。

5. 抗体问题:抗体亲和力弱、浓度不足,都可能形成条带畸形。

6. 显色问题:底物配制不正确,孵育时间过长等。

7. 膜本身质量问题也可能导致条带形态异常。

我建议从这几个方面重新检查实验过程中的每个环节,找到可能的原因,调整优化实验条件,以获得规整的条带形态。也可以增加试验重复,对比不同结果。希望这些建议可以提供思路,找到实验可能存在的问题。

考虑以下几点原因:

1）样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂；建议样本处理时在冰上操作。

2）二聚体或多聚体存在，建议增加蛋白质变性过程及强度。

3）上样量过高：降低上样量，减少抗原含量。

4）二抗条件过强：降低二抗浓度、缩短二抗孵育时间或改变温度等。

可能是胶没有配好 ，凝胶未能完全聚合，胶中有颗粒或气泡，凝胶未冷却好；也可能是电泳时电压过高。

检查一下 AP 及TEMED有没有过期；所有配胶用的试剂都要过滤，保证配胶过程中胶内无气泡；同时要等到胶完全凝固好后再上样；适当降低电压。