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科研学霸天团，48小时有问必答

问Co-IP实验对抗体有什么要求

未来9

抗体的选择十分重要，选经过 IP 验证的抗体，可以减少假阳性概率。

3 回答827 围观

问为什么其他方式能验证出两个蛋白之间有相互作用，用Co-IP却没有验证出来？

whilt-shirt

首先确定两个蛋白到底有没有相互作用。可以结合酵母双杂交，LUC或者其他的实验结果。在其他实验验证有互作的情况下，调整COIP 条件。看来你的步骤，其中孵育的时间两个overnight，太长了如果某个蛋白不稳定你这两三天的实验蛋白就降解了，加抗体后2h，加proteinG beads再4h就可以了，不需要太久。另外完全可以适应标签抗体偶联好的商业化Flag beads or HA beads, 这样

3 回答835 围观

问如何确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的并避免污染的发生？

张张321

使用单克隆抗体有助于避免污染发生

4 回答675 围观

问Co-IP实验中如何去除重链、轻链的影响？

迟C迟

捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种，使用针对检测抗体物种的特异性二抗；如果有可能，捕获抗体采用没有恒定区的纳米抗体。

3 回答1061 围观

问用Co-IP验证出两个蛋白互作，但是其他验证方式却不互作，是不是Co-IP不可靠？

迟C迟

COIP跟其他验证蛋白互作的实验比起来可信度还是很高的，投文章编辑也是认可度比较高的。如果实在对实验结果有所怀疑，建议重复。

3 回答346 围观

问Co-IP中没有检测到与目的蛋白相互作用的蛋白或检测得到的信号太弱的原因有那些？

dxywode

3 回答323 围观

问蛋白质不表达，蛋白表达量低的原因？

迟C迟

蛋白不表达就说明他的转录和翻译，这个过程出现了问题。表达量低说明他这个合成蛋白质的效率是很低的，可能在盘旋折叠最后一个部分出现了问题。

3 回答3626 围观

问如何确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中，而不是细胞的溶解

bamboopiggy

采用免疫荧光共定位相互作用的蛋白，看荧光的位置。

3 回答359 围观

问如何从鸡蛋清中提取卵类黏蛋白？

府宅

取新鲜蛋清，搅拌，加入等体积10% pH1.15的TCA溶液，继续搅拌直至絮状消失，调pH到pH3.5±0.2的范围以内。pH值调好后，将烧杯用保鲜膜密封好, 室温下静置4小时。 4000r/min 离心15min，弃沉淀，上清液用滤纸过滤，收集滤液。调pH到pH3.5±0.2的范围以内，边轻轻搅动边加入加3倍体积的预冷丙酮，用塑料薄膜封好杯口，在4℃下放置4h以上。3000r/min离心15mi

3 回答2059 围观

问免疫组化和 Western Blot 可以用同一种抗体吗？

whilt-shirt

大部分可以，有些不可以，具体要看抗体的说明书

6 回答1580 围观

问大分子蛋白总转不出来，该如何调节电泳条件?

dxy_a3w222q8

大蛋白先试试marker能转上吗，如果能应该没问题，如果不能适当在此基础上延长转膜时间；蛋白的上样量也可以加大吧，可以试试。

6 回答1262 围观

问蛋白质微阵列技术的影响因素有哪些？

迟C迟

蛋白质微阵列就是蛋白芯片技术，固定在芯片上的蛋白可以是：抗原、抗体、小肽、受体和配体、蛋白质-DNA和蛋白质-RNA复合物等。所以影响因素包括样品质量、检测技术和数据分析。

3 回答567 围观

问蛋白质免疫印迹试验结果膜上没有目标条带是怎么回事？

whilt-shirt

考虑转膜没转上或者一抗二抗失活

3 回答494 围观

问双向凝胶电泳为什么能一次性分离上千种蛋白质？

bamboopiggy

因为双向电泳一个方向分辨出不同分子量的蛋白,另外一个方向是同样分子量的蛋白，有不同的电荷，按照电荷的多少，再将同样分子量的蛋白细分，所以能从电荷和分子量两个方面来区分蛋白。

3 回答481 围观

问谷类蛋白质凝胶在实际生活中有那些应用？

未来9

对各种水进行过滤、分离，从而对水质进行纯化处理。

3 回答611 围观

问染色质为什么要片段化？片段化的长度为什么是200-1000？片段化过度或不足对实验会有什么影响？

bamboopiggy

你说的是做chip吧？chip是要把染色质打断,好让你的目的蛋白和dna更好的结合，太长了构象复杂，不利于蛋白质和dna的结合，一般打的片段，在200-1000bp之间，就可以。太小了，可能结合不好。

3 回答811 围观

问蛋白样品可不可以反复溶解？

小暮

最好不要反复冻融蛋白样品在制备后建议分装，用多少，拿多少

4 回答498 围观

问两步法和一步法有何优劣呢？在什么情况下要选择其中一种有没有要求？

bamboopiggy

其实这个要看你的实验目的，单纯的要跑realtime pcr，一步法，两步法都可以。但是如果想同时拿cdna做别的实验，就用两步法。先得到cdna，再跑realtime。一步法简单，省时间。两步法，稍微复杂，但是也不难做。

3 回答944 围观

问想要精确产量，怎么做RNA定量呢？除了买仪器还有什么方法吗？

bamboopiggy

可以将rna稀释，然后再去测浓度，一般浓度值在1000左右比较好。

3 回答451 围观

问如何检测不同批次的RNA之间的差异，有什么好方法能避免批次差异呢？

迟C迟

不同批次提出来的RNA有差异是在所难免的，只要提取质量高、浓度达到要求，一般不影响接下来的实验。

3 回答498 围观

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