大分子蛋白总转不出来，该如何调节电泳条件?

大蛋白先试试marker能转上吗，如果能应该没问题，如果不能适当在此基础上延长转膜时间；蛋白的上样量也可以加大吧，可以试试。

如果总蛋白没做出来，那最大的可能是转膜没有转好。不知道你有没有预染marker上有200多kd条带的那种，可以辅助你鉴定转膜效率。转膜完以后还要再染下胶，看看大分子量的蛋白有没有转过去。做这样的蛋白，胶浓度不能大，一般8%左右最好。

使用低浓度的胶，增加转膜电流和时间

电泳电压不能太高，否则蛋白会受热变性．电泳时间不能太长，所以电泳液最好经常换新的，保证两个小时左右跑完！

一般采用：1.半干转可以缩短转膜时间和促进转膜效率；2.若无相应转膜仪，可加大转膜电流和延长转膜时间，需要注意的是维持转膜液低温状态，可转膜每半小时换预冷好的转膜液即可

蛋白大约300KD 6%胶 ，湿转：0.2PVDF膜 甲醇浸润5s ，转膜液：10%甲醇 + 0.1%SDS ， 转膜条件：30v 4° 过夜转20h 左右，结果不错