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        最终PCR反应中假阳性结果,可能是RNA 中存在的基因组DNA,怎么去除gDNA呢?

        相关实验:ELISA 实验

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        RIRI00

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        4 个回答

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        whilt-shirt

        有帮助

        现在有去除gDNA的逆转录试剂盒,可以试试

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        bamboopiggy

        有帮助

        现在的反转录kit,基本都包括DNase,可以去除genomic dna。实在不行也可以单买dna酶,来用。

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        天一湖医者

        有帮助

        可以通过加入DNaseⅠ去除gDNA。但是在反转录实验前需将DNaseⅠ灭活(通过高温加热或加入EDTA),否则该酶会将cDNA降解,但是高温灭活DNaseⅠ会造成RNA的降解和损失,加入EDTA灭活又会引入新的RNA酶抑制剂。

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        dxywode

        有帮助

        RNA中存在的基因组DNA(gDNA)污染可能是终PCR反应中假阳性结果出现的原因,目前已存在很多方法去除gDNA,比如通过DNAase对提取的RNA进行预处理。

        以上方法无可避免会造成RNA的蛋白污染,因而这里介绍一种可绕开酶处理的方法,即针对RNA设计一种包含内含子或内含子-外显子边界的引物,如此DNA就不会产生扩增抑或即便扩增了其条带大小也与cDNA不同。

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