• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        染色质为什么要片段化?片段化的长度为什么是200-1000?片段化过度或不足对实验会有什么影响?

        相关实验:蛋白质复合体性质的研究

        user-title

        小布丁瑶瑶

        染色质为什么要片段化?片段化的长度为什么是200-1000?片段化过度或不足对实验会有什么影响?

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        未来9

        有帮助

        确保蛋白/DNA 复合物更容易与抗体起反应

        200-1000bp是为了保证实验良好的精度

        片段化过度或不足可能会导致ChIP实验的失败

        user-title

        小暮

        有帮助

        片段化的目的是确保高分子量染色质的蛋白质/DNA复合物是可溶的,能被ChIP抗体接近;为确保染色质免疫共沉淀(ChIP)实验有良好精度,片段化如果小于200bp就是片段化过度,蛋白的结合位点被打断,本来存在的结合就结合不了,如果过度片段化可能破坏抗原表位降低PCR效率

        如果片段长度大于1000bp,会分离获得包含目标序列的DNA,但所要研究的蛋白可能会离您目标序列有700个核苷酸的距离;导样本丢失,假阴性。

        片段化的目的是确保高分子量染色质的蛋白质

        /DNA

        复合物是可溶的,

        能被

        ChIP

        抗体接近;为确保染色质免疫共沉淀(

        ChIP

        )实验有良好

        精度,一般片段化的大小在

        200-1000bp

        ,一般

        300-600bp

        均能获得

        较好的

        ChIP

        结果。如果小于

        200bp

        的话,蛋白的结合位点很有可能

        被打断,原因是由于每个核小体结合

        DNA

        的序列长度为

        175bp

        ,加上

        不同核小体间的

        linker DNA

        序列,这样每个核小体结合

        DNA

        的最小

        序列大概在

        200bp

        左右,如果片段长度大于

        1000bp

        ,您将会分离获

        得包含目标序列的

        DNA

        ,但所要研究的蛋白可能会离您目标序列有

        700

        个核苷酸的距离;如果过度片段化可能破坏抗原表位降低

        PCR

        率,片段化不全导致样本丢失,可能会获得假阴

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你说的是做chip吧?chip是要把染色质打断,好让你的目的蛋白和dna更好的结合,太长了构象复杂,不利于蛋白质和dna的结合,一般打的片段,在200-1000bp之间,就可以。太小了,可能结合不好。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序