• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        两步法和一步法有何优劣呢?在什么情况下要选择其中一种有没有要求?

        相关实验:ELISA 实验

        user-title

        RIRI00

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        其实这个要看你的实验目的,单纯的要跑realtime pcr,一步法,两步法都可以。但是如果想同时拿cdna做别的实验,就用两步法。先得到cdna,再跑realtime。一步法简单,省时间。两步法,稍微复杂,但是也不难做。

        user-title

        小暮

        有帮助

        一步法RT-PCR能克隆微量mRNA而不需构建cDNA文库

        两步法RT-PCR首先用反转录酶合成cDNA,然后以cDNA为模板进行PCR

        一步法比两步法更快速、简便、减少了污染机会、减少了RNA二级结构、减少了PCR反应的错配率;

        两步法的优势在于中间产物cDNA,便于保存;且第二步PCR只取逆转录反应产物的1/10进行反应,有利于PCR条件的调整,实验重现性强;

        两步法灵敏度比一步法高;但两步法容易产生污染问题;两步法的实验预算要低于一步法。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        一步法比两步法更快速、简便、减少了污染机会、减少了RNA二级结构、减少了PCR反应的错配率;

        两步法的优势在于中间产物cDNA,便于保存;且第二步PCR只取逆转录反应产物的1/10进行反应,有利于PCR条件的调整,实验重现性强;

        两步法可以在第二步PCR反应体系中加入特异性引物,其灵敏度比一步法高;

        两步法包括第一链cDNA合成和随后的PCR反应,容易产生污染问题;

        两步法的实验预算要低于一步法。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序