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科研学霸天团，48小时有问必答

问为什么有时候pcr产物在凝胶电泳的时候跑不出加样孔？

不下雨的早晨

胶凝固的时间不够久，电泳液用太多次，存在蛋白污染

4 回答723 围观

问PCR与EDTA，验证mRNA表达

汤姆卜丽波

用真空采血管取血，然后就是正常的试剂盒pcr操作，有专门的试剂盒，也可以破碎细胞提DNA

3 回答370 围观

问以cDNA为模板进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳条带清晰，但回收后浓度检测特别低，4ng/ul左右，且260处没有峰值，是为什么呢

汤姆卜丽波

回收的时候切胶要注意不要切到其他地方，切胶也不要紫外照太久这种就是回收没收到

6 回答306 围观

问RT－pcr，跑出来是一条直线是什么原因？

迟C迟

一条线说明未起峰，未检测到目的基因。检查模板制备、引物、体系是否有问题。

6 回答2738 围观

问qpcr的结果求助？

Eason老歌迷

做的挺好😄。很棒。还是要提醒你一句。设计引物有几个需要注意的点。如下:产物不能形成二级结构。引物长度一般在15~30碱基之间。G+C含量在40%~60%之间。引物自身不能有连续4个碱基的互补。引物5′端可以修饰，引物3′端不可修饰。引物3′端要避开密码子的第3位。等

4 回答718 围观

问求助｜荧光定量这样的结果是不是意味着目的基因未表达

dxy_dfr562pw

如果操作和引物探针确定没问题的话，应该是没表达啥目的基因了……

5 回答308 围观

问qpcr和RT PCR在定量定性上面有什么区别？

Eason老歌迷

RT-PCR是PCR的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为cDNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物，使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。实时PCR属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。他俩相结合，能用微量的RNA来找出特定时间细胞组织内的特别表达的遗

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问发文章时pcr实验要哪些原始数据

Eason老歌迷

可能需要你的原始图片，甚至还有荧光定量的数据。或者一些溶解曲线，之类的。

6 回答13606 围观

问做qPCR曲线出现异常？

whilt-shirt

有可能是模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，仪器会默认起峰的线条仍为基线部分，将扩增曲线往基线位置下拉，因此你的曲线就趴下来了。这种情况大家也不要慌，可以减小基线终点（例如基线期默认 3 - 15 个循环，改为 3 - 10 个循环），重新分析数据，一般都能得到一个比较好的结果。

5 回答717 围观

问DNA扩增的时候，PCR条带拖尾？

dxywode

拖尾在生物专业词汇叫做smear。造成此的原因有多种。一般来讲，有以下几点：1，引物设计不佳，造成了拖尾现象。2，PCR中DNA浓度加的太多，造成了拖尾。3，mg2+浓度加的太高，造成了拖尾。4，跑胶电压不合适，造成了拖尾。5，退火温度不合适，造成了拖尾。这些都可能造成拖尾，请认真分析之。谢谢。

5 回答5535 围观

问有没有大佬知道PCR 突然扩增不出产物是什么原因？

Eason老歌迷

可能是以下原因导致的，你可以看看模板DNA是否被降解，引物浓度是不是合适，自己再那个说明书的浓度范围再设置一个范围去摸索一下。或者你的引物设计是不是合适。

6 回答617 围观

问q-pcr验证高通量测序结果，结果为啥反复横跳？

汤姆卜丽波

这样的结果是不行的，三次独立重复的话。每次都要提RNA之后测浓度，必要时还要跑胶防止降解

6 回答485 围观

问关于gDNA基因组DNA

汤姆卜丽波

一般pcr.扩增模板浓度几ng到100ng都可以，普通的酶就可以扩出来，应该不是浓度的问题，跑之前确定一下模板没有降解，然后引物特异性和有效率

5 回答1496 围观

问我想问下有人做过RNA核质分离实验吗？

Eason老歌迷

我们也遇到过类似情况。我们觉得可能是由于实验中操作或者其他原因导致核泄漏了，细胞核内的物质到了胞质中。

3 回答2007 围观

问菌落PCR胶孔堵塞没有条带

汤姆卜丽波

不是的，那种情况是pcr产物里有蛋白质污染才会那样，在胶孔里，跑不下来

4 回答1528 围观

问提取出的RNA在逆转录之前跑胶验证，这一步是杂志必须要求的么，具体怎么跑呢，和DNA一样么

汤姆卜丽波

有着杂志会要求跑一下，看RNA有无降解，保险的话还是跑一次，如果杂志要求了。步骤如下:将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。配制琼脂糖凝胶。 ①称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml 锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。 ②待胶凉至60--70 ℃，依次向其中加入9ml甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0.5μ|溴化乙锭，混合均匀。 ③灌制琼脂糖凝胶。样品准备：

4 回答1489 围观

问RTpcr过程中提取出来的RNA必须要跑胶验证有无降解么？

bamboopiggy

如果实验严谨的话，是要跑一下的，但是现在一般提完直接逆转，除非实验出问题，很少有人会去检测RNA是否降解。

4 回答1363 围观

问检测新冠的qPCR出来的ct值正常范围是多少？

bamboopiggy

Ct值越低，代表病毒浓度越高；Ct值越高，则表示病毒浓度越低。阳性：Ct值<37，可报告为阳性。

4 回答2759 围观

问qPCR中Mg2+浓度控制在哪个范围比较合适？

bamboopiggy

一般情况下Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。但是现在的qpcr的酶一般都是mix，已经给加好Mg2+了，不需要单独加

3 回答654 围观

问不同体积的 PCR 管，我该怎么选呢？

bamboopiggy

根据你的实验目的，以及你用的pcr的可以放多大的管子来决定。

3 回答555 围观

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