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        请问普通PCR一般退火温度大致在多少范围?是否可根据实际情况微调?

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

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        一只胖头鱼丿灬

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        4 个回答

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        在模板变性后温度快速冷却至40℃~60℃(某个退火温度 )的时候,可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多,引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞,这就使PCR后期的过程成为可能。退火温度与时间,取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸,G+C含量约50%的引物,55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        退火温度以55度为起始,一般是primer的low temperature-5,要是不低于55,就可以用

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        一般在50-65度,或者70度做两部法PCR。可根据模板含量,GC值进行相应调整

        user-title

        未来9

        有帮助

        PCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR.

        一般来说,退火温度比Tm值要低上5度左右。另外,也可以根据你设计引物的软件比如primer5.0或Olige 6 推荐的温度。

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