构建载体最后测序乱码怎么办？

插入片段有过测序结果吗?是挑的单克隆提的质粒吗?p出来的产物跑的DNA凝胶是单一且很亮的条带吗?有没有杂带或者拖尾呢?

如果质粒PCR和酶切都正确的话，那质粒应该是没问题的。有可能是质粒提取纯度不够，混有其他质粒，所以测序有重叠峰。另外一个是质粒或者载体上有特殊结构，测序过不去，可以尝试反向测序，也可以转染细胞进行wb验证。

构建好的载体转化到宿主菌后可以直接把菌液送去测序，菌p影响因素太多了，容易失败，测序测全长就行了

考虑是有大量的重叠序列，可以试一试分段测序

您的问题可能涉及到多个方面，以下是一些可能的解决方法：

优化质粒提取和纯化过程：在进行质粒提取和纯化过程时，可能会出现多种问题，例如DNA片段的损失、纯度不够等。您可以尝试使用其他厂家的质粒提取和纯化试剂，或者尝试优化现有的实验步骤，以提高DNA的纯度和质量。

优化PCR扩增条件：您可以尝试优化PCR扩增条件，例如优化引物浓度、缩短扩增时间、降低退火温度等。此外，您还可以尝试使用其他DNA聚合酶，以提高扩增效率和特异性。

检查DNA序列和载体设计：您需要确保DNA序列和载体设计没有问题，特别是与限制性内切酶识别位点有关的问题。您可以使用多个限制性内切酶对载体进行切割，以确认限制性内切酶识别位点是否正确。如果有问题，您可能需要重新设计或合成载体。

检查目的基因的序列：检查您要克隆的基因序列是否存在问题，例如插入缺失、插入反向等。您可以重新合成或重做PCR扩增来解决这些问题。

检查转化实验：如果您已经确定了载体和目的基因序列没有问题，那么您可能需要检查转化实验是否成功。您可以使用其他转化方法或转化菌株来解决这些问题。

原因：所挑选的重组子不是单克隆，所提供的测序用质粒中含有两种以上插入片段不同的质粒；或是是送测序的菌液污染。