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        【求助】构建载体

        丁香园论坛

        1938
        各位大侠好!现有pcDNA3-mCherry和pGEM-hgene两个东西在滤纸上,老师就说让构建载体,具体是什么意思啊?我理解的是一个真核表达载体和构建好的pGEM质粒,但是不知下一步该怎么做?恳请各位好心的大侠指点一二。
        直接插入cDNA吧
        那个pGEM就是已经插入了DNA的载体。请问这两个东西溶下来以后要怎么保存
        剪下来。TE融解,再就好跟感受态去做转化了。再挑单克隆,再培养多点,再提质粒鉴定。
        这样就保种保好了。既有质粒,也有菌液。
        谢谢!pcDNA3-mCherry也用同样的方法溶解下来吗?然后怎么保存?能否详细解释一下pcDNA3-mCherry是什么
        pcDNA3-mCherry意思是:带有mCherry(红色荧光蛋白)标记的真核表达载体pcDNA3.0。
        哈哈,这个字面意思这样,但是怎么用呢,荧光标记蛋白是空载体的时候就加进去的吗
        zhangyuxianggx wrote:
        哈哈,这个字面意思这样,但是怎么用呢,荧光标记蛋白是空载体的时候就加进去的吗

        荧光蛋白与目的蛋白形成融合蛋白。
        把你的目的基因连接到多克隆位点处就行了。
        如果荧光蛋白是在目的蛋白的C端,目的基因不能有终止密码子。
        谢谢!但是我不明白我的目的基因在pGEM-gene这个质粒上,为什么还要给我pcDNA3-mCherry这个载体

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】构建载体

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